液相色譜儀操作步驟及主要事項

一、液相色譜儀主要操作步驟

1． 過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。   

2． 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。  

3． 打開HPLC工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統。  

4． 進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。   

5． 有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10 ml/min。   

6． 調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。   

7． 設計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。   

8． 進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。   

9． 關機時，先關計算機，再關液相色譜。   

10)． 填寫登記本，由負責人簽字。

二、液相色譜儀注意事項：

1． 流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。

2． 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要讓液體過柱子。   

3． 所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。  

4． 壓力不能太大，不要超過2000 psi

5.  選擇高品質的柱子，并注意使用方法；可以延長柱子的使用壽命。一般認為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質都相同，對品質管理很嚴格的廠家而言，這說法是成立的。但如果廠家品質管理不夠嚴格，即使是同一批號的新柱子之間的品質也有差異。所以，選用柱子時必須選擇管理嚴格的高品質柱子，我們知道，任何柱子使用過后都會產生變化。尤其如在強酸或強堿條件下使用，柱子更易產生變化。因此，應盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發新分析方法時，許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經使用。柱性會改變；如此一來，使用舊柱子開發出來的新分析方法，很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時。發生無法達到預定效果的情況。