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        磷酸鈣法轉染HEK293T細胞2012/07/27
        
					
        
				磷酸鈣法轉染HEK293T細胞一.試劑配制無菌水ddw：高溫滅菌；分裝；2XHBS：280mMNaCl10mMKCl1.5mMNa2HPO412mMglucose50mMHEPESAdjustthepH,every0.05pHfrom7.00to7.45using10NNaOH,thenaddddw.tothefinalvolume.過濾滅菌，分裝；2MCaCl2：過濾滅菌，分裝。二.實驗過程：1.鋪細胞：選擇狀態良好的293T細胞傳代，2-3x105個細胞/35mmdish。2.20-24h后
					
        
				
        
								
        
					
        細胞劃痕實驗2012/07/26
        
					
        
				細胞劃痕實驗材料：6孔板marker筆直尺20微升槍頭（滅菌）無血清培養基PBS準備：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺內）流程：1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻地劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2、在空中加入約5X105個細胞，具體數量因細胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿。3、第二天用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不要傾斜。4、用PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入無血清培
					
        
				
        
								
        
					
        大鼠肺成纖維細胞培養2012/07/19
        
					
        
				大鼠肺成纖維細胞培養1材料1.1動物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。1.2試劑PBS、培養液（低糖DMEM，新生牛血清、青*、1%明膠,PBS、0.25%*），碘酒和酒精綿球。1.3手術器械眼科直剪2把、眼科彎剪2把、眼科直鑷2把、眼科彎鑷2把、玻璃平皿3套，25cm2塑料培養瓶（Costar）。2方法2.1明膠包被培養瓶過夜（準備2-3個），取出明膠，用2ml培養液沖洗培養瓶一遍，置于超凈臺中。2.2解剖取肺：將乳鼠在酒精中浸泡后取出，轉移至超凈臺上的玻璃培養皿中，用碘酒消毒胸部皮膚，再
					
        
				
        
								
        
					
        熒光標記法檢測細胞凋亡2012/07/16
        
					
        
				熒光標記法檢測細胞凋亡一、儀器與試劑1.TdT酶（25U/μl）；2.*標記的-dUTP（Biotin-dUTP）或地高辛標記的dUTP（Digoxingening-11-dUTP）1nmol/μl；3.反應緩沖液；4.洗滌緩沖液；5.異硫氰酸熒光素（FITC）標記的親合素或鏈霉親合素（2.5μg/ml）或抗地高辛抗體（1:30）；6.PI染液（含PI5μg/ml及0.1%無DNA酶活性的RNA酶）；7.PBS緩沖液；8.塑料蓋玻片；9.貼壁生長的培養細胞；10.懸浮生長培養細胞的甩片或涂片；冰
					
        
				
        
								
        
					
        原代細胞傳代技術2012/06/19
        
					
        
				原代細胞傳代技術一、貼壁細胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。2、加入1ml左右消化液（*或與EDTA混合液）輕輕搖動培養瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養液終止消化。4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養瓶中，置37℃培養箱中繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。二、懸浮細胞的傳代1、直接傳代①讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。②用吸管吹打形
					
        
				
        
								
        
					
        293-T細胞培養2012/06/14
        
					
        
				293-T細胞培養293-T細胞培養應注意以下幾個方面：1.用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質量較高，在普通血清中細胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解，按說明加入*。2.培養液中應加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會影響細胞狀態。如果用20%的HEPES，每次配培養液時每200ml培養液可加入5ml.加入HEPES后1640培養液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。3.消化所用*可選擇0.125%濃度，且不要消化時間太長。也有研究者認為不用*，直接吹打使細胞脫壁，但使用*效果
					
        
				
        
								
        
					
        細胞 轉染細胞的穩定篩選2012/06/13
        
					
        
				細胞轉染細胞的穩定篩選1．確定抗生素作用的*濃度：不同的細胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預試驗，確定抗生素對所選擇細胞的zui低作用濃度。①提前24小時在96孔板或24孔板中接種細胞8孔，接種量以第二天長成25%單層為宜，置CO2孵箱中37℃培養過夜。②將培養液換成含抗生素的培養基，抗生素濃度按梯度遞增0,（50,100,200,400,600,800和1000μg/ml）。③培養10-14天以絕大部分細胞死亡濃度為準,一般為400-800μg/ml，篩選穩定表達克隆時可比該濃
					
        
				
        
								
        
					
        人γ干擾素ELISA試劑盒 簡易操作說明2012/06/11
        
					
        
				人γ干擾素ELISA試劑盒簡易操作說明人γ干擾素ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人γ干擾素（IFN-γ）水平。用純化的人γ干擾素（IFN-γ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素（IFN-γ），再與HRP標記的γ干擾素（IFN-γ）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素（IFN-γ）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光
					
        
				
        
							
				
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