125I標記物的鑒定方法

1．放射化學純度 是指單位標記物中結合于被標記物上的放射性占總放射性的百分率，一般要求大于95%。常用的測定方法是利用三氯醋酸將待測樣品中（預加白蛋白助沉淀）所有蛋白質沉淀，離心后測定沉淀物（標記物）的放射性并計算其占待測樣品總放射性的百分率。該項參數還是觀察在貯存期內標記物脫碘程度的重要指標。
2．免疫活性（immunoreactivity） 指制備的標記物與抗體結合的能力。它反映標記過程中被標記物免疫活性受損情況。測定方法是用少量的標記物與過量抗體反應，然后測定標記物與抗體結合部分的放射性，并計算與加人標記物總放射性的百分比，該值越大表示抗原免疫活性受損越少。
3．比放射性（specificradioactivity） 是指單位化學量標記物中所含的放射性強度，也可理解為每分子被標記物平均所結合放射性原子數目，常用Ci/g、mCi/mg或Ci/mmol等單位表示。標記物比放射性較高時，可提高方法的靈敏度（因相同放射性強度時，高比放射性者標記物用量少）；但比放射性過高時，輻射自損傷大，標記物的免疫活性易受影響，且貯存穩定性差。比放射性計算方法有計算法和自身置換法：
（1）.計算法：依據標記反應中放射性核素的利用率（標記率）來計算。
比放射性（uCi/Pg）＝（投入的總放射性X標記率）/被標記物化學量
標記率（核素利用率）＝（標記物總放射性/總投入放射性）X100%
該法計算操作簡便易行，但影響因素多，結果欠。
（2）.自身置換法（self-displacement） 該法通過比較標記抗原與標準抗原的免疫活性來測定純化后標記物的比放射性。方法為：作一條常規RIA標準曲線，其反應系統由抗體（*）、標記抗原（定量）和不同劑量的標準抗原組成；由于標記抗原與標準抗原的分子濃度之和大于抗體的結合容量，標記抗原與抗體的結合率（B/T%）隨標準抗原的增加因競爭抑制而減少；同時另作一條標記抗原自身置換曲線，反應系統僅含有抗體和不同劑量的標記抗原，由于抗體*，故標記抗原的結合率也隨標記抗原總量的增加而減少，即所謂自身置換。因此，若標記抗原與標準晶抗原具有相同的免疫活性，則上述兩條曲線應平行。表明在相同的放射性結合參數（B/T%）水平上，與抗體結合的標準抗原和標記抗原的物質濃度*相同；由此可通過選擇不同放射結合水平的標準抗原化學量（以ng/m1或nmol/ml表示）和相應的標記抗原放射性計量（以cpm/ml表示，其中cpm可換算為Ci或nCi），經直線回歸即可計算出該標記物的比放射性）。

原文地址:/biotech/Immunity/2009/j81948417.html