基因組DNA提取常見問題及解決方案

基因組DNA提取常見問題及解決方案
1 沒有或獲得的DNA量很少
A 確保DNA Wash Buffer中是否加入要求量的無水乙醇
B 樣品裂解不充分
建議：加大裂解緩沖液的量或減少樣品的量；將組織材料充分研磨或勻漿；需要蛋白酶K消化的樣品，增加蛋白酶K的用量，或者延長蛋白酶K的消化時間，并將組織盡可能的減碎。
C 吸附不充分
建議：上柱前，請確保裂解混合液中加入適量的無水乙醇。
D DNA洗脫不當
建議：洗脫液較少時，應加在膜的中間；采用ddH2O洗脫時，應保證pH值在7.0-8.5；樣品量較少時，若洗脫體積過大，會相應降低DNA的濃度
E 樣品中DNA含量少
如果樣品中本身DNA含量少，應加大初始材料的量，并相應的增加各種緩沖液的量。
2 柱子堵塞，或者膜上顏色殘留
A 樣品過多
建議：減少樣品的使用量，或者增加裂解緩沖液的量
B 樣品裂解不充分，使用了過多的樣品，或者樣品沒有研磨充分
建議：減少樣品的使用量，充分研磨樣品或者增加裂解液用量
C 裂解后，吸取上清時，帶入雜質
建議：離心后，小心吸取上清，避免吸起沉淀，如有沉淀吸起，再次離心后吸取上清。
3 OD260/OD280偏低
A 蛋白質殘留
建議：離心后，吸取上清時，應盡量避免吸起沉淀
B 用ddH2O洗脫DNA時，因為pH和離子濃度的影響，OD比值可能會偏低，但是并不代表純度低。
C OD260/OD280偏高
A 有RNA殘留
建議：檢查RNase A是否加入，或者RNase A活性下降。
5 不能順利用于后續酶反應實驗
A 乙醇殘留
建議：在洗脫前，將吸附柱開蓋再次離心，以*去除殘留的乙醇。