1. 石蠟切片在染色過程中出現脫片現象？

一般來說，如果用多聚賴氨酸包被過的片子做正常免疫組織化學染色的話是不會掉片子的。但如果要做抗原修復的話，如果片子處理不好的話是有可能掉片子的。可以試試一下的方法：

a.我們一般用APES：丙酮=1:50的處理液來處理片子，處理5min左右，然后水洗，烘干既可用于貼片。如果把水滴再處理好的片子上，水比較聚的話說明片子處理的好。

b.貼片子的時候，展片的時間要把握好，不要太長，否則不利于貼牢。

c.烤片子也很重要，切好的片子zui先不要馬上收起來，而是水平至于烘片臺上37度兩個小時以上，一是水分*烘干。然后做染色前zui再在60度烘箱烘1個小時。

d.再補充一點 ，石蠟包埋時，酒精梯度脫水以及浸蠟等一點要充分，這對貼片也有影響。

2. DAB顯色后發現切片著色不均勻：如一片著色，一片不著色或染色淺？

著色不均勻可能與你的實驗手法有很大關系，可能原因有：

a.切出的片子厚度本身可能就不一樣，切出一片厚，一片薄，這樣可能造成著色深淺不一。

b.有可能是顯色液底物加到片子上后沒有搖勻，造成局部底物濃度不一致，所以加完顯色液后zui將片子來回左右晃動幾下，使片子上所有區域的底物濃度一致。

c.如果你的片子是中間的染色深，靠近邊上的淺，那有可能是你蠟圈畫的太小，顯色液覆蓋的面積不過大而產生了邊緣效應。zui外側的組織片zui離顯色液外緣0.5cm。

3. 免疫組化結果老是出現陰性結果？

免疫組化出現陰性結果有可能組織本身就沒有信號，也有可能是抗體出了問題。你可以找一些陽性組織做一下，以確定是抗體的問題還是組織本身就沒有所檢測的抗原表達。還有，你可以提高抗體的濃度，或者試一試抗原修復等方法，也許會得到意想不到的結果。

4. 切片染色后背景太深，不易區分特異性與非特異性著色？

a.也許是抗體本身有問題，因為有很多公司的抗體質量并不好，很容易上背景，可以換一種抗體 試試。

b.如果經費不允許換抗體的話，你可降低抗體的濃度，并隨時注意觀察顯色，在能看到信號的情況下盡量降低背景。

c.可以換一種封閉液，不同的封閉液對某種來源的抗體來說，會有不同的封閉效果。

d.可以在一抗和二抗中加入一定比例的你所檢測動物組織的正常血清，這樣可以去除一部分非特異性染色。

5. 有人在一抗孵育前用tritonX100來通透細胞，對石蠟切片需要否？
用石蠟切片做免疫組化是不需要透膜處理的，一是因為石蠟切片比較薄，另外一個原因是在包埋過程中細胞膜已經被破壞，所以這一步可以省略。

6. 蘇木素復染的時間應該是多少？復染過度咋辦？

復染時間不需要太長，當然這也要根據蘇木精的質量來確定，但基本上不要超多一分鐘。染色過深的話可以用酸性的水溶液（在水里滴加少量濃鹽酸）分色，分色的另外一個目的是洗掉蘇木精在細胞質中的非特異性結合，這樣可以使細胞質中的特異信號更明顯。所以不管復染是不是過度，分色這一步zui不要省掉。分色后記得再用氨水返藍一下。

7. 抗原修復應在滅活POD之前還是之后？

熱修復后不需要滅活POD