實(shí)驗(yàn)原理
核酸和蛋白質(zhì)是構(gòu)成生物有機(jī)體的主要成分；核酸是生命的zui基本物質(zhì)。在生物體中它們結(jié)合成核蛋白的形式存在。核酸按其化學(xué)組成可以分成兩大類，一類含D-2-脫氧核糖的稱為脫氧核糖核酸（DNA），主要存在于細(xì)胞核中；另一類含D-核糖的稱為核糖核酸（RNA),主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)；由于核酸極不穩(wěn)定，在較劇烈的化學(xué)。物理因素和酶的作用下很易降解，因此在制備時(shí)應(yīng)防止過酸、過堿及其它引起核酸降解的因素作用。在提取中為防止組織中廣泛存在的核酸酶降解的作用，應(yīng)在低溫下進(jìn)行，必要時(shí)加入抑制劑，如檸檬酸鹽、氟化鈉、砷酸鹽等，皂土也可抑制DNA酶的活性，如果采用（SDS)或作蛋白質(zhì)變性劑來分離核酸，它們同時(shí)也可以使核酸降解酶破壞，因此常獲得較好的效果
一、RNA的提取與測定
由于RNA的種類來源很多，因而提取制備方法各異，一般有法，去污劑法和鹽酸胍法，其中法實(shí)驗(yàn)室zui常用。組織勻漿后用處理離心，RNA即溶于上層被酚飽和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮狀沉淀析出。此法較好除去DNA和蛋白質(zhì)，且獲得生物活性的RNA。
工業(yè)上常用稀堿和濃鹽酸法提RNA，用這兩種方法提取的核酸均為變性RNA。主要用于制備核苷酸的原料。其工藝較簡單，濃鹽法是用10％氯化鈉的溶液，在90攝氏度提取3—4小時(shí)，冷卻，離心，上清液乙醇沉淀RNA。稀堿法用0.2％氫氧化鈉是酵母裂解，然后酸中和，除蛋白和菌體，上清液乙醇沉淀的RNA ,或調(diào)核酸等電點(diǎn)PI2.5沉淀。
RNA廣泛存在啤酒酵母，面包酵母，酒精酵母和各種動物組織中。
本實(shí)驗(yàn)用動物肝臟經(jīng)組織搗碎，制成組織勻漿，用0.14mol/L氯化鈉溶液提取。把細(xì)胞之中的核糖核蛋白提取出來，留下含有DNA的細(xì)胞核物質(zhì)，調(diào)節(jié)PH4.5再將RNA和蛋白質(zhì)分開，因?yàn)樵?.14mol/L氯化鈉溶液中，RNA－蛋白溶解度大。DNA－蛋白溶解度低，而在1mol/L氯化鈉溶液中溶解度zui大。
RNA含量測定
RNA含量的測定方法很多：紫外吸收法、定磷法、常用地衣酚測定其原理是：當(dāng)RNA與濃鹽酸共熱時(shí)，即可發(fā)生降解，形成核糖繼而轉(zhuǎn)變成糠醛，后者與3.5－二羥基甲苯（地衣酚）反應(yīng)，在鐵或銅離子催化下，生成鮮綠色復(fù)合物，反應(yīng)在670nm處有zui大吸收峰，RNA濃度在10-100μg/ml范圍內(nèi)，光吸收與RNA濃度成正比，地衣酚特異性差，凡戊糖均有些反應(yīng)。
試劑和器材
材料：動物肝臟
試劑：
0.14mol/L氯化鈉
標(biāo)準(zhǔn)RNA溶液： 100μg/ml
地衣酚試劑(現(xiàn)用現(xiàn)配)
80％溶液
95％乙醇
器材：勻漿器、離心機(jī)、分光光度計(jì)、燒杯、量筒等
操作方法
RNA提取：
勻漿：稱取3克牛肝剪碎，加20ml 0.14mol/L氯化鈉溶液10000rn/min左右勻漿1分鐘左右
離心：勻漿后溶液離心8000 rn/min離心7分鐘，量取上清液毫升數(shù)，沉淀物留做提取DNA用
除雜質(zhì)：加等體積80％酚溶液于上清液中，攪拌充分混合10－20分鐘，置冰箱冷卻靜止30-40分鐘，離心取上層水相含有RNA，棄下層酚相含蛋白質(zhì)和DNA等雜質(zhì)
沉淀RNA:取上層水相含RNA溶液，加入2倍體積95％冷乙醇，攪拌，充分混合，置冰箱中冷卻，至出現(xiàn)白色絮狀物－RNA，離心8000 rn/min離心7分鐘，取沉淀物
溶解：用少量去離子水（約4毫升）溶解沉淀物，用以測定其含量
