士鋒生物絨毛染色體制備

時間：2014-8-5閱讀：801

絨毛來源于胚胎的中胚層，zui早的初級干絨毛出現(xiàn)于孕三周初，孕8周左右是絨毛發(fā)育zui旺盛時期。目前國內(nèi)外絨毛取材多選于8-9周。研究資料表明，絨毛取樣不影響胚胎的發(fā)育及胎盤的功能。但取樣的失敗可導致胚胎丟失而終止妊娠。
絨毛取樣前者首先要檢查陰道分泌物以判別陰道的潔凈度，防止取樣導致宮內(nèi)感染。其次需做B超檢查，一是確定胚胎大小，二是確定胚芽有無心血管搏動，三是確定胚芽在子宮內(nèi)的位置，用以判別取材時間，是否取材及取樣器進宮的角度及深度。
1、實驗材料
婦科陰道沖洗物品、絨毛取樣器、5ml注射器、培養(yǎng)皿、小鑷子、5ml離心管、甲酸、檸檬酸鈉、冰乙酸、PMRI 1640、秋水仙素、載玻片等。
2、培養(yǎng)液配制
PRMI 1640 10-15ml
秋水仙素10ug/ml 1ml
3、操作過程
（1）1‰新潔而滅沖洗陰道，用卵圓鉗固定子宮頸，根據(jù)婦查及B超提示選擇角度及濃度探性插入絨毛取樣器，當有彈性阻擋感且深度符合B超所示時，抽出取樣器內(nèi)芯，接上5ml注射器，抽出4-5ml，此時，注射器內(nèi)可見有血性液體流進；
（2）取一干凈培養(yǎng)皿，內(nèi)加PRNI 1640 5ml，內(nèi)含秋水仙素0.06ug/ml。慢慢抽出取樣器，將所吸出物注入培養(yǎng)皿內(nèi)，并用1640沖洗注射器及取樣器，混勻。置培養(yǎng)箱30-40分鐘；
（3）挑選發(fā)育良好的絨毛放入另一小培養(yǎng)皿中，用預溫37℃的0.075M。KCL與10%檸檬酸鈉1∶1混合液漂洗兩次。
（4）用眼科小剪剪碎絨毛，再將2滴秋堿加入上途漂洗低滲液低滲30分鐘；
（5）加3∶2的甲醇冰乙酸固定液0.2ml，預固定，1000rpm8分鐘，棄上清液；（6）加新鮮配制的3∶2固定液3ml；固定30分鐘，2000rpm8分鐘，棄上清液；（7）第二次固定可加3∶1甲醇冰乙酸固定液3ml固定30分鐘，2000rpm8分鐘，棄上清液；
（8）離心后，加所余體積的60%冰乙酸，打勻，2分鐘后加等量甲醇，打勻，2000rpm8分鐘，棄上清液。
（9）3m1 3∶1甲冰固定液過夜，冰水制片；
（10）80℃考片2小時，自然冷卻。（11）G分帶處理，觀片。

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