士鋒生物植物原生質(zhì)體的制備

一、實驗?zāi)康?nbsp;
原生質(zhì)體是指植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁的裸露部分。它在培養(yǎng)條件下，①具有再生細(xì)胞壁，進(jìn)行連續(xù)的細(xì)胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有攝取外源大分子、細(xì)胞器，以及細(xì)菌，病毒的能力，因此是進(jìn)行遺傳操作，基因轉(zhuǎn)移的好材料；③通過同種和異種植物的原生質(zhì)體融合，可產(chǎn)生異核體，實現(xiàn)體細(xì)胞雜交，培育出新品種。通過此實驗，要求初步掌握原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)的基本操作技術(shù)和方法。 
二、實驗原理 
去掉植物細(xì)胞壁的方法可以是機(jī)械的人工操作，也可以利用酶解法。較早利用機(jī)械法制備原生質(zhì)體的*Klercker（1892），直到1960年英國科學(xué)家Cocking才*次用酶法大量制備原生質(zhì)體。本實驗以植物的葉肉組織為材料，利用纖維素酶和果膠酶來消化細(xì)胞壁，分離細(xì)胞。 
三、實驗用品 
器具：顯微鏡、離心機(jī)、離心管、剪刀（2）、鑷子（2）、吸管、小培養(yǎng)皿、載片、蓋片。 
試劑：0.16mol/L CaCI.2.H2O、20%蔗糖液、酶解液 
材料：油菜或菠菜或煙草 
四、實驗方法步驟 
1、取材 根據(jù)實驗?zāi)康暮蜅l件選取不同的材料 
2、分離原生質(zhì)體 
① 撕葉下表皮 
② 酶解 將撕去下表皮的葉片剪成小塊，放在盛有5mL酶液的小培養(yǎng)皿中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25~28℃下酶解60~90分鐘 
3、收集純化 
（1）用吸管將酶解液吸至5mL離心管中，以600rpm離心5分鐘以上，使原生質(zhì)體沉降 
（2）將上清（酶解液）回收，剩下原生質(zhì)體及殘渣于管底 
（3）加氯化鈣液約2mL，輕輕吹打均勻 
（4）用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL，出現(xiàn)下部蔗糖液，上部原生質(zhì)體懸浮液 
（5）以600rpm離心10分鐘，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體 
4、觀察或培養(yǎng) 
取少許原生質(zhì)體于載片上，蓋片觀察其形態(tài)，或者將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，再生植株 
五、實驗報告 
1、簡述植物原生質(zhì)體制備的方法步驟； 
2、按鏡下觀察繪制原生質(zhì)體。