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時間：2017/3/8閱讀：6630

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目的基因序列與載體連接后，要導入細胞中才能繁殖擴增，再經(jīng)過篩選，才能獲得重組DNA分子克隆，不同的載體在不同的宿主細胞中繁殖，導入細胞的方法也不相同。

一、轉(zhuǎn)化

由于外源DNA的進入而使細胞遺傳性改變稱為轉(zhuǎn)化，早在1943年，Avery等就發(fā)現(xiàn)有毒肺炎雙球菌的DNA與無毒肺炎雙球菌共培養(yǎng)后產(chǎn)生有毒性的肺炎雙球菌后代的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。但DNA進入細胞的效率很低，在分子生物學和基因工程工作中可采取一些方法處理細胞，經(jīng)處理后的細胞就容易接受外界DNA，稱為感受態(tài)細胞，再與外源DNA接觸，就能提高轉(zhuǎn)化效率。例如大腸桿菌經(jīng)冰冷CaCl2的處理，就成為感受態(tài)細菌，當加入重組質(zhì)粒并突然由4℃轉(zhuǎn)入42℃作短時間處理，質(zhì)粒dna就能進入細菌；用高電壓脈沖短暫作用于細菌也能顯著提高轉(zhuǎn)化效率，這稱為電穿孔（electroporation）轉(zhuǎn)化法。
二、感染

噬菌體進入宿主細菌，病毒進入宿主細胞中繁殖就是感染（infection）。用經(jīng)人工改造的噬菌體活病毒作載體，以其DNA與目的序列重組后，在體外用噬菌體或病毒的外殼蛋白將重組DNA包裝成有活力的噬菌體或病毒，就能以感染的方式進入宿主細菌或細胞，使目的序列得以復制繁殖。感染的效率很高，但DNA包裝成噬菌體或病毒的操作較麻煩。

三、轉(zhuǎn)染

重組的噬菌體DNA也可象質(zhì)粒DNA的方式進入宿主菌，即宿主菌先經(jīng)過CaCl2，電穿孔等處理成感受態(tài)細菌再接受DNA，進入感受態(tài)細菌的噬菌體DNA可以同樣復制和繁殖，這種方式稱為轉(zhuǎn)染（transfection）。M13噬菌體DNA導入大腸桿菌就常用轉(zhuǎn)染的方法。重組DNA進入宿主細胞也常用轉(zhuǎn)染方式。zui經(jīng)典的是1973年建立的磷酸鈣法，其利用的基本現(xiàn)象是：
DNA如以磷酸鈣-DNA共沉淀物形式出現(xiàn)時，培養(yǎng)細胞攝取DNA的效率會顯著提高。用電穿孔法處理培養(yǎng)的哺乳類細胞也能提高細胞攝取DNA能力，但所用外加電場的強度、電脈沖的長度等條件與處理細菌者都很不相同。用人工脂質(zhì)膜包裹DNA，形成的脂質(zhì)體（Liposome）可以通過與細胞膜融合而將DNA導入細胞，方法簡單而有效，但缺點是有細胞毒性和血清的不親和性，近年來人們發(fā)現(xiàn)了一種更為有效的轉(zhuǎn)染試劑－陽離子聚合物，其克服了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑細胞毒性大，在體內(nèi)易被血清清除等缺點，具有轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單而日益受到重視。

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