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1 材料與方法
1.1 研究對象 從1995年3月至1996年3月在湖南省某縣以HBsAg為指標篩檢前來終止妊娠的孕婦及其配偶。選擇8名男性HBV攜帶者與其子宮內受染有胎兒為研究對象。攜帶者以elisa檢測常規五項HBV血清學標志與PCR檢測HBV DNA確定。均無既往肝炎史，谷丙轉氨酶正常，無乙肝疫苗注射史，年齡在25～35歲之間。8名配偶以上述方法檢測均無HBV感染，年齡在23～33歲之間。夫婦雙方血清、白細胞、精液在住院期間收集。取終止妊娠3月以上胎兒。胎兒血在產出當時采取并分離血清保存于－20℃，同時分離白細胞。無菌條件下取肝臟組織。胎兒血清、白細胞、肝臟任何一項HBV DNA陽性者判定為子宮內感染。另外選擇5對無HBV標志的夫婦與胎兒為對照。
1.2 檢測方法
1.2.1 ELISA檢測HBV五項血清學標志：HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc。
1.2.2 各種標本的處理及DNA的抽提 抗凝血液標本以白細胞分離液分離白細胞并PBS反復洗滌以除去血液中HBV DNA的影響，恢復體積分小包裝低溫保存備用；肝臟標本取2g與PBS2ml在無菌研磨器中研磨成勻漿PBS反復洗滌后加PBS2ml后分小包裝低溫保存備用；精液標本收集后離心將精子與精漿分開，精子以PBS反復洗滌以除去精漿中HBV DNA的影響，以PBS恢復體積分小包裝低溫保存備用。上述標本末次洗液PCR檢測HBV DNA均陰性，各種標本按常規以、氯仿、異戊醇法提取DNA［3］。
1.2.3 PCR技術檢測HBV DNA 引物合成于中科院上海細胞所。S區與C區各設計一對套式PCR引物(表1)。*輪PCR產物1∶50稀釋作為第二輪PCR的模板，每輪PCR均設陽、陰性對照與空白對照。常規PCR方法參考文獻［3］。
1.2.4 序列分析 取S區與C區第二輪PCR產物，以醋酸胺與異丙醇純化用Fmol DNA cycle sequencing system(promega公司)以雙脫氧鏈末端終止法測序［3］。r-32P-ATP購自北京亞輝公司。放射自顯影后讀片。結果輸入計算機用DNASIS軟件處理并與發表的序列(genebank)比較。
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