士鋒生物體外抗體形成細胞檢測（液相小室法）

一、基本原理
溶血空斑試驗，又稱空斑形成細胞（Plague Forming Cell, PFC）試驗，是一種體外檢測抗體形成細胞的方法。將一定量洗滌過的綿羊紅細胞注射入小鼠腹腔，四天后將小鼠殺死，取脾臟制成脾細胞懸液，內含抗體形成細胞。然后將脾細胞、綿羊紅細胞，補體混合孵育。由于PFC所分泌的抗體和綿羊紅血球結合形成抗原抗體復合物，在補體作用下可使紅細胞溶解，于特制的小室內形成肉眼可見的溶血空斑。一個空斑即代表一個抗體形成細胞。

二、實驗材料
1. 解剖器械、試管、1ml吸量管
2. 載玻片、石蠟盤、酒精燈、微量加樣器
3. ICR小鼠（北京大學醫學部實驗動物中心提供）
4. 5％和10％綿羊紅血球（SRBC）
5. 補體（豚鼠血清，經SRBC吸收，臨用時稀釋成合適濃度）

三、實驗方法
1. 小鼠免疫及脾細胞懸液的制備：
將5％SRBC （0.4ml）注射于小鼠腹腔，4天后拉脫頸椎處死，取出脾臟放在已加入6ml Hank’s液的平皿中。在100目不銹鋼網上研磨，過濾混勻，從中吸取lml加入試管中，加滿Hank’s液混勻，離心1000rpm，10分鐘。將沉淀的脾細胞恢復lml容積，即為約107／ml濃度的細胞懸液。
2．制作小室：
取無脂載玻片（75mm×25mm）, 平置桌面上。用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個小室。將此雙層玻片的一側長邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊（無需浸入過深，以能封閉小室邊緣為準）。
2. 小室灌注細胞懸液：
取107／ml脾細胞懸液100ml
10％SRBC 200ml
補體 200ml
Hank’s液 1m1
混勻后，用尖吸管灌注小室、蠟封、標記、平放于玻片盤內，置37℃孵箱30—45分鐘。

四、實驗結果
觀察小室內的透明空斑，一個空斑即代表一個空斑形成細胞（PFC），即b細胞。

五、注意事項
（1） 小室注入液體時不要留有氣泡。
（2） 小室邊緣需用石蠟封嚴。
（3） 37℃孵箱孵育時，必須放平，不可傾斜。
（1） 觀察結果時，應注意辨別空斑與氣泡的區別，避免將氣泡誤認為溶血空斑。 一、基本原理
溶血空斑試驗，又稱空斑形成細胞（Plague Forming Cell, PFC）試驗，是一種體外檢測抗體形成細胞的方法。將一定量洗滌過的綿羊紅細胞注射入小鼠腹腔，四天后將小鼠殺死，取脾臟制成脾細胞懸液，內含抗體形成細胞。然后將脾細胞、綿羊紅細胞，補體混合孵育。由于PFC所分泌的抗體和綿羊紅血球結合形成抗原抗體復合物，在補體作用下可使紅細胞溶解，于特制的小室內形成肉眼可見的溶血空斑。一個空斑即代表一個抗體形成細胞。

二、實驗材料
1. 解剖器械、試管、1ml吸量管
2. 載玻片、石蠟盤、酒精燈、微量加樣器
3. ICR小鼠（北京大學醫學部實驗動物中心提供）
4. 5％和10％綿羊紅血球（SRBC）
5. 補體（豚鼠血清，經SRBC吸收，臨用時稀釋成合適濃度）

三、實驗方法
1. 小鼠免疫及脾細胞懸液的制備：
將5％SRBC （0.4ml）注射于小鼠腹腔，4天后拉脫頸椎處死，取出脾臟放在已加入6ml Hank’s液的平皿中。在100目不銹鋼網上研磨，過濾混勻，從中吸取lml加入試管中，加滿Hank’s液混勻，離心1000rpm，10分鐘。將沉淀的脾細胞恢復lml容積，即為約107／ml濃度的細胞懸液。
2．制作小室：
取無脂載玻片（75mm×25mm）, 平置桌面上。用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個小室。將此雙層玻片的一側長邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊（無需浸入過深，以能封閉小室邊緣為準）。
2. 小室灌注細胞懸液：
取107／ml脾細胞懸液100ml
10％SRBC 200ml
補體 200ml
Hank’s液 1m1
混勻后，用尖吸管灌注小室、蠟封、標記、平放于玻片盤內，置37℃孵箱30—45分鐘。

四、實驗結果
觀察小室內的透明空斑，一個空斑即代表一個空斑形成細胞（PFC），即b細胞。

五、注意事項
（1） 小室注入液體時不要留有氣泡。
（2） 小室邊緣需用石蠟封嚴。
（3） 37℃孵箱孵育時，必須放平，不可傾斜。
（1） 觀察結果時，應注意辨別空斑與氣泡的區別，避免將氣泡誤認為溶血空斑。