如何使用斐林試劑來測定還原糖

一、原理：還原糖可以將斐林試劑中德二價銅離子還原為一價銅。反應(yīng)終點(diǎn)可由次甲基藍(lán)指示，根據(jù)一定量德斐林試劑*還原所需的還原糖量，可計算所加入樣品中還原糖的含量。

二、試劑與材料

1、斐林試劑：甲液：稱取69.3g硫酸銅（CuSO4 5H2O）用蒸餾水溶解，定容至1000ml。

乙液：稱取346g酒石酸鉀鈉，100g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解，定容至1000ml。

2、1%次甲基藍(lán)溶液：稱取1g次甲基藍(lán)溶解于100ml蒸餾水中，于棕色瓶中儲存。

3、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液：準(zhǔn)確稱取2g（預(yù)先于105℃烘2小時左右至恒重），加水溶解，定容至1000ml。此為0.2%的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。

堿式滴定管、電爐、樣品糖液

三、操作方法

1、斐林試劑的標(biāo)定：吸取斐林試劑甲、乙液各5ml，置于250ml三角瓶中，加入10ml蒸餾水，并從滴定管中加入0.2%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液若干毫升，其量應(yīng)控制在后滴定時（消耗0.2%的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖0.5-1.0ml）。搖勻，于電爐上加熱至沸，并保持微沸2min，加2滴1%次甲基藍(lán)溶液，繼續(xù)用0.2%標(biāo)準(zhǔn)的葡萄糖溶液滴定至藍(lán)色消失為終點(diǎn)。此滴定操作在1min內(nèi)完成，記錄耗用的0.2%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液體積為V0毫升。

2、定糖預(yù)備試驗(yàn)：吸取斐林甲、乙液各5ml，置于250ml三角瓶中，準(zhǔn)確加入10ml樣品糖液，搖勻于電爐上加熱至沸。加2滴1%次甲基藍(lán)溶液，用0.2%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液滴定至藍(lán)色消失。消耗標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液V1毫升。

3、樣品中還原糖的測定：準(zhǔn)確吸取斐林甲、乙液各5ml,置于 250ml三角瓶中，準(zhǔn)確加入10ml樣品糖液，補(bǔ)加（V0-V1）毫升蒸餾水，并從滴定管中預(yù)先加入（V1-1）毫升0.2%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。搖勻，于電爐上加熱至沸，保持微沸2min，加入2滴1%次甲基藍(lán)溶液，繼續(xù)用0.2%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖滴定至藍(lán)色消失。此操作在1min內(nèi)完成。記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液總體積為V毫升。

四、計算

還原糖含量（g/ml，以葡萄糖計）=（V0-V）×0.2×0.1×n

式中：V0-斐林試劑標(biāo)定值;V-樣品糖液測定值;0.2-標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液濃度;10-樣品糖液體積;n-樣品稀釋倍數(shù)