實驗中常用抗體的應用范圍及選用方案

臨床活檢工作中，對于各種腫瘤的正確判斷，歷來是外科病理學的核心問題。因它關系到患者的治療和預后的問題。在免疫組化技術沒開展以前，主要靠HE，特殊染色和組織化學來進行鑒別和診斷各種腫瘤，這些在當時雖然解決了不少的問題，但是對于較為復雜，較為多型性的腫瘤，就不能對其起源及所含的成分作出正確的判斷。

隨著免疫組化工作的開展，給許多以往有待于解釋原因的病理診斷上帶來了福音。許多以往無法解釋原因的病例，經現今免疫組化染色技術的處理后，能夠對其起源，相關的抗原或抗體成份給予顯示出來，為腫瘤的診斷提斷了形態學的依據。雖然如此，對于一些較為復雜的抗原，就要根據具體情況作具體分析。

在生物界里面某些細胞僅具有一個抗原的決定簇，這是極少見的，而常見的是具有數百個乃至數千個的抗原決定簇。數量之多但又不是千篇一律，并非都在細胞的表面表達出來，加上細胞的排列有高有矮，有長有短，切片時有的被切到細胞膜，有的被攔腰斬斷，因此在一張切片上看到的同一種抗原的表達也不一致，有的在細胞核，有的在細胞膜，也有的在細胞漿，這種現象是由于切片的原因所致。但是，抗原的表達，在原來的表達上就有核、漿、膜之分。有的抗原可在一個部位表達，有的抗原 則可在兩個 部位表達 ，例如PCNA，它可以在細胞核表達，也可在細胞漿表達 。有的抗原，可表現為雙向表達，如上皮（樣）腫瘤間皮腫瘤和滑膜內瘤等，用角蛋白標記時，可有陽性表達，用波形蛋白標記時，也可有陽性表達。

對于上述的許多現象，在觀察檢測時，就要特別地小心，不斷地積累經驗，以便于更好地鑒別各種抗原的所在部位。某些抗原不是在任何時候能表達出來的它們 需要一定的時間和條件。有人根據腫瘤細胞增生的能力將其分為三個階段：

1.進入細胞周期的增殖細胞，這包括G1、G2及M期的細胞。

2.暫時未進入細胞周期，但在某特定的時期和條件下，使其開始增殖的細胞（G0期）。

3. 靜止的再進入增殖周期的細胞，這些細胞己分化成熟，根據新陳代謝的規律，它們逐漸地進行消之階段。

上述三個階段中，與腫瘤的發生發展關系zui為密切的是增殖細胞。因此，臨床檢測各種腫瘤抗原的表達，應根據上述 三個階段來加以區別，仔細加以分析，在作出診斷前，應根據免疫組化的表達，細胞的分化成度來加以區別，不要以為用了某種抗體抗原不表達就確定是不屬該抗體來源的腫瘤。有人在檢測淋巴瘤活性的研究中，發現PCNA在細胞周期的S期數量增高，G2期下降，核分裂期zui低，在 G1期又開始增高。

我們在檢測各種腫瘤的抗原時發現，在同一病例中，增生的腫瘤細胞抗原表達強，成熟的細胞表達與增生的細胞差不多，幼雅的細胞表達較弱，未分化的細胞呈陰性。基于上述的情況，我們應充分認識到，診斷各種腫瘤，免疫組化起到了重要的作用中，它可以為診斷提供可靠的準確的形態學依據，它為腫瘤的來源的定性，提供了理論及實物。但是，我們也應該認識到，任何事情都 不能有的準確，免疫組化的檢測也一樣，有時也會受到未分化細胞的制約，因此，在作出診斷前，應多做多方面的檢查，結合各方面的情況，作出正確的判斷。

為了更好地應用各種抗體來檢測相應的抗原，下面我們將介紹常用抗體檢測范圍。

（一）、常用上皮組織及腫瘤標記物

角蛋白（Keratin）

角蛋白分為表皮角蛋白和細胞角蛋白兩種，這是根據其分部的部位而分的。表皮角蛋白包括皮膚表皮，消化道粘膜上皮、腺上皮甲狀腺濾泡上皮、氣管、支氣管上皮、肺泡上皮，角膜上皮、前列腺上皮等。細胞角蛋白包括頜下腺，胰腺，胸腺，細胞，肝細胞，腎小管細胞等。目前，應用上述細胞中間絲角蛋白作為抗原所制備的抗體有單克隆抗體和多克隆抗體。角蛋白可有19個亞型 ，分為堿性和酸性，從1-8為堿性，9-19為酸性，分子量40-68不等，復層鱗上皮多為高分子量，單層上皮則多為低分子量，了解這些在臨床的鑒別診斷及抗體的應用中都 有的幫助。目前，檢測這類特質的抗體很多，根據不同的克隆生產出不周類型的抗體。常用的抗體有：

①單克隆小鼠抗人細胞角蛋白（Monoclonal mouse anti human cytokeratin）克隆為MNF116。

該抗體應用范圍，各類的冰凍切片，涂片，細胞培養片和經甲醛固定石蠟包埋的組織切片 。用本抗體檢測的陽性組織有：鱗狀上皮，甲狀腺濾泡上皮消化道上皮，胰腺膽管上皮，肝膽管上皮，角膜上皮等以及發生于上述來源的腫瘤。應該注意的是有一些腫瘤在檢測時，可出現兩種陽性物，即用兩種抗體來檢測如采用CK和Vimentin，可出現雙向表達陽性的腫瘤有：癌內瘤，子宮內膜腺癌肺腺癌，上皮樣內瘤，滑膜內瘤，唾液腺肌上皮瘤，間皮瘤等等。這是由于在這些腫瘤中存在著兩種不同的中間絲的緣故。

應用該抗體檢測呈陰性的腫瘤有：各種淋巴瘤，各類肌源性的腫瘤，惡性黑色素瘤，骨腫瘤，纖維組織腫瘤，脂肪腫瘤，神經組織腫瘤和精原細胞瘤等。

在檢測某些腫瘤時，常可出現這樣的問題，在同一張切片上，同樣的鱗狀細胞癌的細胞，有的抗原表達為強陽性，有的表達為中度陽性性，有的表達為弱陽性，甚至有的呈陰性。這主要是由于各種細胞處于增生的不同階段，細胞分泌的抗原量不同，因而表達 也不同。

該抗體可用各種方法檢測，但用真空負壓LSAB法。產品說明書注明該抗體稀釋度1：50至1：100，我們使用為1：100。

②單克隆小鼠抗人細胞角蛋白，克隆為LP34。該抗體的使用范圍，檢測各種組織基本上與①號抗體相同，但效果不如①號。

③單克隆小鼠抗 人細胞角蛋白，克隆為35BH11。該抗體的特點是：A，可檢測幾乎所有的非鱗狀上皮包括卵巢腺癌，胃腸道腺癌，甲狀腺癌，肝癌， 子宮癌，腎癌等。B、不與鱗狀上皮起反應。C、對膀胱癌，鼻咽癌，胸腺癌等部分陽性。但是，該 抗體只能用于冰凍切片 ，涂片和細胞培養片。不能用于石蠟切片 。

④單克隆小鼠抗 人細胞角蛋白，克隆34BE12。該 抗體屬于高分子量類型，它可檢測鱗狀上皮管上皮和 復層上皮的組織及其來源的腫瘤。

適用范圍：可用于各種類型的切片 。

2. 單克隆小鼠抗人上皮細胞膜抗原 （Monoclonal mose anti human epithelial memberance antigen,EMA）

上皮細胞膜抗原是上皮細胞表面大分子糖蛋白物質，它不僅存在于各種上皮，以及各種上皮來源的腫瘤，也可存在于部分非上皮及其來源的腫瘤，如漿細胞，組織細胞等。

應用EMA來檢測正常的組織時，其陽性表達主要在細胞膜上，但在檢測腫瘤時，這種陽性物不僅在細胞膜上出現，也可在細胞漿中見到。實驗中發現，腫瘤細胞在分化增生時，陽性物表達強陽性。當腫瘤細胞趨于成熟或已成熟時，陽性物表達較弱，腫瘤細胞未分化時，抗原表達呈陰性。

EMA在檢測上皮組織及其來源的腫瘤組織時，抗原表達陽性，在檢測非上皮來源的腫瘤如漿細胞瘤，滑膜內瘤，上皮樣內瘤，平滑肌內瘤，神經鞘瘤，及來惡性神經鞘瘤時，抗原也可表達為部分陽性。因此認為：EMA不是上皮性來源腫瘤所*的標記物，它的特異性不高。

該 抗體適用范圍廣，適合于各種類型的切片，應用真空負壓LSAB法檢測時，稀釋度在1：100。

3. 癌胚抗原（Carcinombryonic antigen ,CEA）

自1965年Go等從結腸癌分離出一種腫瘤的相關抗原后，經過進一步的研究后發現，它存在于胎兒的腸里，由于人們將其稱為癌胚抗原。在實際應用中，CEA是一種廣譜的標記物。經實驗證明，它對胃癌，腸癌，肺癌，乳腺癌，胰腺癌，子宮頸癌，子宮體腺癌，卵巢癌，皮膚鱗狀細胞癌，膀胱移行上皮癌，食道癌等，抗原表達陽性，在上述的同類組織及癌旁類性組織，也可見到陽性物，有文獻報導，用CEA標記滑膜內瘤，間皮瘤，上皮樣內瘤和腦膜瘤，也可表達陽性。

目前，CEA有兩種產品，一是單克隆抗體，另一是多克隆抗體。

① 單克隆小鼠抗 人CEA，克隆為A5B7。

該抗體的特點，純度高，雜質含量少，很少引起非特異性染色，同時，也不與含糖蛋白的物質起反應，因此，背景清晰干凈。

該抗體可檢測上述的病種及其來源的組織，適用于各種切片的染色。稀釋度為1：100。

② 兔抗人CEA。該抗體為多克隆抗體，純度不如①號抗體，檢測及適應與①號抗體相同，但效果不如①號抗體，且較容易產生背景。稀釋度在1：300。

4.山羊抗人甲胎蛋白（Goat anti human alphafeloprotein,AFP）

AFP主要由胎兒肝細胞和卵黃細胞產生的一種酸性糖蛋白少量由胎兒的胸腺、肺、胃、腸道的細胞產生。AFP也不是一種肝癌*的標記物。初用時把AFP作為原發性肝癌的一項特異性診斷指標。隨著免疫組化的深入開展和研究的深入進行，實驗結果證明：AFP的升高不僅在原發性肝細胞癌的病例，在生殖細胞腫瘤卵黃瘤和睪丸胚胎癌的病例也可大量見到。

用AFP檢測后顯示陽性的病例有：原發性肝細胞癌，胃癌，卵黃 瘤和睪丸胚胎癌等。其陽性 表達部位主要在細胞漿，也有少量在細胞膜和細胞核上。

該抗體適合于各種切片的標記，可用任何一種 免疫 方法來進行染色，稀釋度為1：100-1：300。

上述四種類型的抗體可作為來源于上皮的腫瘤及其它來源的腫瘤的區別。只要損傷正確，抗體的質量沒問題，就可獲得滿意的結果。使用時應根據不同的組織，不同的形態結構，來選擇合適的抗體。當然有的腫瘤決不是用一兩種抗體就能夠把它們給予區分開來。因此，要根據不同的情況合理使用抗體，以便作出正確的診斷。

（二）常用的間葉源性組織及其腫瘤的檢測抗體

間葉源性組織范圍廣，內容多，它包括肌肉，纖維結締組織，脂肪，血管，周圍神經，骨，軟骨，淋巴等組織。由于這方面涉及的東西較多且較復雜，因而在上述方面所發生的腫瘤，是腫瘤病理學中zui棘手和zui疑難的問題之一。隨著免疫組化技術在腫瘤鑒別診斷中的應用，已經克服了許多以往無法克服或者難以克服的問題。當前，應用于這方面檢測的抗體越來越多，下面將介紹幾種常用的抗體：

1.波形蛋白（Vimentin ,Vim）

Vim是原始的中間絲，它存在于所有的間葉組織細胞中，可以向神經膠質，肌源性細胞和上皮細胞中間絲演變。Vim是一種單克隆抗體，臨床應用來作鑒別診斷的有：鑒別癌與內癌，前者陰性，后者陽性;鑒別小細胞性腫瘤，這時應多用幾種抗體，如CK，LCA和Vim，如為淋巴瘤，尤文氏瘤或神經母細胞瘤，Vim為陽性;鑒別黑色素瘤和低分化癌時，Vim陽性。

應用Vim檢測腫瘤陽性的有：HDR-S細胞，B免疫母細胞形淋巴瘤，漿細胞瘤，T 免疫母細胞及多形性T 淋巴瘤，平滑肌瘤和肉瘤，纖維瘤和肉瘤，脂肪瘤和肉瘤，橫紋肌肉瘤，血管瘤，粘液瘤，神經纖維瘤，鞘瘤，惡性神經鞘瘤，惡性纖維組織細胞瘤，纖維組織細胞瘤，惡性巨細胞瘤，間葉肉瘤，骨瘤和骨肉瘤，骨巨細胞瘤，軟骨細胞瘤，骨軟骨瘤，軟骨母細胞瘤，軟骨肉瘤，滑膜肉瘤，精原細胞瘤，黑色素瘤和惡性黑色素瘤，脊索瘤癌肉瘤，尤文 氏瘤，腦膜瘤，卵泡膜細胞瘤，顆顆細胞瘤，間皮瘤，等等。

在正常組織中，Vim標記陽性組織的有：

平滑肌和橫紋膠肌細胞，肺泡吞噬細胞，血管及內皮細胞，肝臟枯否氏細胞，滑膜細胞，漿細胞，奇形細胞，室管膜細胞，卵巢顆粒細胞，黑色素細胞等。

Vim是目前用來鑒別上皮性腫瘤還是間葉源性鐵常用抗體之一，不過，在應用于鑒別腫瘤時，應多選用幾種抗體。

Vim的抗體現市售的有幾種：

⑴單克隆小鼠抗Vim克隆3B4，該抗體稀釋度較高，可在1：200，它適用于各種切片，但在使用前必須抗原修復。

⑵克隆小鼠抗豬Vim，克隆V9，該抗體較早前使用，從已檢測的大量病例情況分析，該抗體效果不錯。但該抗體zui大的缺點是稀釋度較不理想，僅在1：10左右，由于稀釋度不大，標記的例數較少，成本較高，現已較少使用。

⒉ Von Willebrand因子

這種抗體在舊叫法中被稱為第Ⅷ因子相關抗原，如今被 稱為Von Willebrand因子，它可在各種內皮細胞和巨核細胞的胞漿中找到，因此在臨床的應用中，它常被用來檢測由內皮細胞來源的各種腫瘤，同時也用來檢測骨髓標本中巨核細胞的增殖。該抗體使用前須做抗原修復。注意抗體有單抗 及多抗之分。

⒊CD34

該抗體被認為是一種穩定的，可靠的血管內皮細胞及其來源的腫瘤的標記物。它對毛細血管，小血管內皮細胞顯示強陽性，對中至大血管內皮細胞量選擇性陽性，對軟組織腫瘤，腫瘤 毛細血管，血管管和血管肉瘤的內皮細胞呈陽性，對淋巴管內皮陰性。使用時須做 抗原修復。

⒋CD31

該抗體與CD34的標記范圍基本一樣。

（三）肌組織及其相關腫瘤的常用抗體

1. 肌間線蛋白（Desmin,DM）

在橫紋肌的微細結構中，有明暗帶之分，在明暗帶的有一薄膜稱為工膜。在心肌纖維結構中，也有相似的工膜。這些結構的主要成份就是由肌間線蛋白構成的。此外，在心肌的閏盤，平滑肌中，也含有肌間線蛋白。

Desmin為一種中間絲蛋白，正常時可分布于平滑肌細胞，心肌細胞骨骼骨細胞和肌上皮細胞。臨床應用時常用來檢測上述細胞來源的腫瘤如子宮肌瘤及肉瘤，胃，腸道 肌源性腫瘤各形，橫紋肌肉瘤和肌上皮瘤等。

該抗體適應于各種組織切片，經抗原修復后結果更佳。

2.肌球蛋白（Myosin）

骨髓肌的微細結構在電鏡下可見到肌原纖維是由1-2千條平行的肌絲集成的來組成，肌絲分為粗肌絲和細肌絲兩種。粗肌絲由許多豆芽狀的肌球蛋白組成。在心肌和平滑肌發育分化中期，也可見到肌球蛋白。

目前，臨床應用的有兩種抗體。

① Myosin（skeletal）

這種抗體用于檢測骨髓肌及其來源的腫瘤它適合于各種切片，抗原修復后結果更好。

② Myosin（smooth Muscle）

這種抗體用于檢測肌上皮及平滑肌細胞以及這方面來源的腫瘤，它適合于各種組織切片，抗原修復后可獲得更好的結果。

3.肌動蛋白（Actin）

肌原纖維由兩種成分組成，細肌絲和粗肌絲。細肌絲則由肌動蛋白，原肌球蛋白和肌原蛋白三種成分組成，其中的肌動蛋白，其分子呈球狀，它們互相連接形成長鏈，每一條細肌絲都由兩條肌動蛋白分子所構成。

現臨床用于檢測肌動蛋白的抗體有如下幾種：

①單克隆小鼠抗人肌動蛋白，克隆為HHF35。它是一種廣譜標記抗體，既可以用于檢測骨髓肌和骨髓肌來源的腫瘤，也可以用于檢測平滑肌，血管平滑肌，心肌，肌上皮細胞及其來源的腫瘤，它適合各種組織切片，不用微波抗原修復，也能獲得很好的結果。稀釋度為1：100。

②單克隆小鼠抗人肌動蛋白（平滑肌）克隆為1A4。該抗體主要用于檢測平滑肌，心肌，血管平滑肌，肌上皮細胞及其來源的各種腫瘤，實驗證明，毛細血管也可被清楚地顯示出來。它適合各種切片，稀釋度為1：100。

（四）淋巴組織及相關腫瘤檢測的常用抗體

淋巴組織的腫瘤成分較為復雜，有些與其它上皮來源的腫瘤在形態上較相似，鑒別較困難。因而免疫組化對淋巴組織腫瘤的定性較準確。淋巴瘤是原發于淋巴結和淋巴結以外各種淋巴組織的惡性腫瘤。根據瘤細胞的形態和結構不同，把它們分成兩大類即何杰金病（Hodgkins disease,HD）和非何杰金淋巴瘤，（Non-hodgkins lymphoma,NHL）。

應用抗體來檢測淋巴瘤的抗體目前有很多，光CD系列就有百余種，雖然各類繁多，但臨床常用的抗體，主要有以下幾種：

1.LCA（Leucoyte common antigen）

該抗體主要用于檢測正常白細胞即淋巴細胞（T.B），粒細胞，組織細胞和單核細胞及其來源的腫瘤。適合各種切片，不需特別處理。稀釋度1：200。

2.T細胞

T淋巴細胞在胸腺中進行分裂分化，形成了具有各種特異性抗原受體的T細胞，因此它又被 稱為胸腺依賴細胞。T細胞數量zui多，功能又是多方面的根據它們的功能可將其分為 輔助T細胞，抑制T細胞和細胞毒性T細胞。

T淋巴細胞在淋巴結的分布通常在副皮質區，因此免疫組化顯色后，在副皮質區可找到陽性細胞，臨床常用的有兩種抗體。

①T細胞，CD45RO克隆為人WHL-1

該抗體幾乎可標記所有的胸腺細胞還可檢測CD4和CD8以及成熟活化T細胞的靜止T細胞亞群及其來源的淋巴瘤細胞，該抗體適合于各種切片，不需各種處理方法，仍可獲得很好的結果，稀釋度為1：100。

②T 細胞，CD3，克隆為PS1

該抗體用來檢測正常和新生的T細胞，對早期的T細胞有較高的特異性。雖然它的特異性較高，但敏感性不如①號抗體。臨床應用時，可兩種抗體同時應用，以利于提高診斷的準確率。它不需各種方法處理。稀釋度為1：100。

3.B細胞，CD20 克隆為L26

B淋巴細胞跟T淋巴細胞不一樣，它的分化分裂是在胚胎肝及骨髓內進行。根據實驗，在淋巴結中的B淋巴細胞，主要分布在濾泡反應中心。經實驗證明，反應中心是B細胞各個時期轉化的場所，基本上需經四個時期：

*期成熟的小淋巴細胞接受抗原信息后體積逐漸增大，細胞核表面出現凹陷或溝紋似裂隙被稱為小核裂細胞。第二期細胞繼續增大，核周圍有少量胞漿，如此被 稱為大核裂細胞。第三期核逐漸變化發展，成為圓形或橢圓形，裂 紋也隨著變化而消失，核內出現核仁，胞漿增多，RNA和蛋白質合成相繼增多，此時被稱為小無核裂細胞。第四期，細胞繼續增大，比原來的小淋巴細胞大好幾倍，核呈圓形或橢圓形，可見核分裂，胞漿豐富，被 稱為大無核 裂細胞。由于B細胞在不同時期的變化，因此在標記時，應使用不同類型的抗體，對其不同時期進行標記和判斷。

在臨床應用中，檢測淋淋巴瘤不象研究淋巴瘤，那樣細致，只要將其分形就可以了。

該抗體不需特殊處理，稀釋度為1：100。

4.骨髓組織細胞抗原，克隆：Mac387

應用抗體的呈色可將淋巴瘤分為三大類形即T、B淋巴細胞形和組織細胞形。該抗體可檢測正常的粒細胞，血液中單核細胞和組織中的組織細胞及其來源的腫瘤。

該抗體不需特殊的處理方法，稀釋度為1：100。

5.CD29

該抗體主要用于標記B 細胞主要用于，B細胞淋巴瘤，B細胞白血病等的鑒別診斷，標記時應做抗原修復。

6.CD56

（五）神經和神經內分泌及其有關腫瘤抗體

1.神經無特異性烯醇化酶（Neuron-specific enolase,NSE）

經研究發現腦組織中有三種同2酶即dd.dr和rr。NSE屬于rr形。它不僅存在于神經細胞及其軸突中，而且存在于各種內分泌細胞及其有關腫瘤細胞內。有人做過實驗，應用NSE檢測69例APUD系統腫瘤，均表達為陽性，在16例外分泌腺如胰腺癌的檢測中 僅有2例陽性。可見NSE對于檢測APUD系統方面的腫瘤是一個很有用的抗體。它適合于各種組織切片，有單克隆和多克隆兩種抗體，應用抗原修復，可獲得更佳結果。

2.嗜鉻蛋白A（chromogranin A）

該抗體可檢測 神經無和 神經內分泌細胞及其來源的腫瘤如：嗜鉻細胞瘤，甲狀腺髓樣癌，胰島細胞瘤，垂體腫瘤，類癌等。抗體分為單抗 和多抗，可適合于各類切片，需做抗原修復。

3. 膠質纖維酸性蛋白（Glial fibrilary acidic protein,GFAP）克隆為6F2

GFAP是中間絲蛋白之一，是星形細胞和室管膜細胞及其來源腫瘤的有效標記物，據對60例星形細胞瘤的免疫組化顯示，其結果均為陽性。因此，它是星形膠質細胞瘤和室 管膜瘤的抗體。早期使用的有多克隆抗體，近來使用的為單克隆抗體，不需要作任何的處理，適應于各種切片。

4.S-100

S-100是從牛腦中分離出來的一種蛋白，經大量的研究發現。它有三種亞形，S-100ao、S-100a和S-100b。它在人的雪旺氏細胞，室管膜細胞，星形細胞， 神經纖維，神經鞘，皮膚黑色素細胞等都可檢測到。因此，它可用于檢測上述組織及其來源的腫瘤。

該抗體適合于各種切片，不需任何處理，可獲很好結果。稀釋度為1：200，應盡量控制背景。

（六）其它

1.甲狀腺球蛋白（Thyroglobulin,TG）克隆為2H11

TG是甲狀腺濾泡細胞合成的一種糖白，由于它的特殊關系，是眾多抗體中特異性較高的一種抗體，僅用于檢測甲狀腺組織及其來源的腫瘤，不需任何處理，可獲很好結果，適應于各種切片，但應請注意控制背景。

2.乳頭狀瘤病毒（Bovine Dapiuomavirus,BPV）

該抗體主要用于檢測生殖系統傳染性的疾病如尖銳濕疣，病毒存在于上皮的挖空細胞中，根據實驗認為，在檢測顯色后，并非所有的挖空細胞都含有病毒，這可能是由于切片或者在制片的過程中，保存不好而丟失。在50例病例的標記中，均可見到含量不等的病毒。該抗體為多克隆抗體，應用真空負壓檢測時，稀釋度可為1：400，應注意背景的控制，不經任何處理，也可獲得很好的結果，適用于各種切片。

3.增殖細胞核抗原（Proliferation cell nuclear antigen,PCNA）

它是一種酸性蛋白，分子量36KD，在DNA復制時為 DNA聚合酶的輔助物，當細胞進入增殖周期時，此蛋白即已出現。它是細胞增殖周期的標記物，尤其是“S”期。適用 于各種切片。

4. 牛堿性磷酸酶（Cow calf alkaline phosphalase,CAP）

該抗體可檢測正常的成骨細胞，小腸細胞，前列腺上皮細胞，全身含有CAP的細胞。但臨床常用它來檢測骨腫瘤及前列腺腫瘤CAP的含量，該抗體不需作任何處理，適合于各種切片。

5.雌激素受體，（Estrogen receptor ,ER）

ER是一種具有特定功能的酸性蛋白，是傳遞激素信息的一種特異性的物質。經研究發現，這種物質存在于癌細胞的細胞核中，如乳腺癌、子宮內膜腺癌，宮頸癌等癌細胞核中。目前，臨床在治療這些癌癥病人時，首先需要檢測ER是否陽性，如為陽性，治療是采用抗激素療法，如為陰性，治療則采用激素療法。總之ER檢測的陽性與否都直接關系到治療方案的選擇，是判斷患者預后的硬性指標。但是目前檢測ER時，必須要做好充分*的抗原修復，據實驗認為，要取得滿意的結果就必須要做長時間的水浴式的抗原修復，即將切片浸入抗原修復液的容器中，然后一起置入鍋中煮沸持續四十分鐘，如果抗原修復時間不夠，不充分，切片也可呈陰性。除此之外，也可采用高壓修復壓，真空負壓和微波修復。

6.孕激素受體（Progesterone receptor ,PR）

PR與ER一樣，在乳腺癌，宮頸癌，子宮內膜腺癌等的治療中，都 被列為必須檢測項目，為制定醫療方案，判斷預后硬性指標，一般的檢測都是ER和PR同時進行，但陽性可以是兩種都陽性或陰性，或一陰一陽，它們的檢測方法，抗原修復都一樣。