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上海博湖生物科技有限公司
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抗體的制備概述
2025-1-20 閱讀(162)
1、多克隆抗體的制備：
①免疫方法：對多克隆抗體，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內免疫法、淋巴結免疫法和混合法等。一般來說，皮下或肌肉免疫法產生的抗體比較多；皮內免疫法所需的抗原量少，在抗原寶貴時特別適用，但與之相對的，它產生的抗體量也不多。混合免疫法的優點是抗原用量小，產生抗體速度快。
②多克隆抗體的制備：將抗原免疫動物（常用的動物為兔、羊、狗等），分離出抗血清并純化抗體。多克隆抗體的均一性較差，其特異性相對較低，因此，多克隆抗體在農藥殘留速測技術中的應用受到一定的限制。但近年來有學者恰恰利用了多抗的交叉反應高的特點，通過制備出具有某類（或某幾種）農藥的“共性結構"的半抗原或者通過制備出含多個抗原決定簇的人工抗原來制備“寬譜特異性"抗體，進行農藥多殘留分析研究。
2、單克隆抗體的制備：
單克隆抗體制備技術最初是由K鰄ler和Milstein（1975）利用B淋巴細胞雜交瘤技術創立的。目前該技術已廣泛應用于疾病診斷及生物、醫學研究、環境和食品安全檢測（監測）等方面。單抗均一性高，只和抗原某一決定簇結合，有更高的特異性，而且，產生抗體的單克隆細胞可在體外傳代繁殖，不受動物免疫時間限制生產抗體。只要管理和培養技術正確，抗體就可無限的產生。基本過程是動物免疫、細胞融合、克隆篩選、單克隆抗體性質鑒定、腹水誘發、收集和純化等。
3、重組抗體的制備：
近年來，隨著蛋白質技術及DNA重組技術的發展，人們通過對抗體產生的基因本質、基因重組抗體篩選技術和直接定位誘導基因操縱技術的研究，獲得用于zhi定空間位置并具有各種特異性、親和性，能忍受一定溫度、pH和有機溶劑的人工重組抗體。一般是將抗原免疫小鼠，一定時間后無菌條件下取出小鼠脾臟，提取脾細胞總RNA，以RNA逆轉錄合成的cDNA為模板，PCR擴增抗體，將抗體中的輕鏈、重鏈連接成ScFv（single-chainvariablefragment）。酶切經PCR擴增的ScFv片段，并與噬菌體載體連接，然后以常規方法轉化入大腸桿菌或其他生物體中。人工培養帶有噬菌體抗體的大腸桿菌，即得到重組抗體。該方法生產抗體速度快，可通過誘變改變抗體特性，使抗體的特異性更強，而且，利用這項技術獲得的噬菌體抗體庫，能同時識別多種農藥，可用于農藥多殘留免疫速測技術的研究。
