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        上海莼試生物技術有限公司

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        陰溝腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒操作步驟

        2022-4-14  閱讀(208)

        陰溝腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒操作步驟:


        1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。


        10×PCR buffer             5μl


        dNTP mixl                 4μl


        引物1(10pM)               2μl


        引物2(10PM)              2μl


        Taq酶(2U/μl)            1μl


        DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl


        加ddH2O至               50 μl


        視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。


        2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。


        3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。


        4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。



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