免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法的原理

    免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法的原理是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的規(guī)律，把已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗原或抗體，然后以它作為探針來檢測組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)物質(zhì)。方法具體種類有直接法、間接法、夾心法和補(bǔ)體法等。在熒光顯微鏡下，根據(jù)其形成復(fù)合物所發(fā)的熒光，來確定判斷檢測物的來源、性質(zhì)和部位。

1、直接法：這是zui早的方法。其基本原理是用已知的抗體標(biāo)記上熒光素后成為特異性熒光抗體，染色時將該抗體直接滴在載玻片上進(jìn)行孵育，使之直接與載玻片上的抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡下直接觀察，作出判斷。該方法評價：簡單易行、特異性高、快速方便，常用于腎活檢組織幾種免疫球蛋白的檢測和病原體的檢測。但其不足是只能檢測相應(yīng)的一種物質(zhì)，敏感性較差，效果有時不理想，目前較少作為更多方面的檢測。

2、間接法：該法的基本原理是用特異性的抗體與切片中的抗原結(jié)合后，繼用間接熒光抗體，與前面的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，形成抗原抗體熒光復(fù)合物。在熒光顯微鏡下，根據(jù)復(fù)合物的發(fā)光情況來確定所檢測的抗原。該方法評價：由于結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上的熒光素抗體增多，發(fā)出的熒光亮度強(qiáng)，因而其敏感性強(qiáng)。目前本法應(yīng)用較廣泛，只需制備一種種屬熒光抗體，即可適用于多種*抗體的標(biāo)記顯示。

3、如果你有針對待查抗原一抗（熒光素標(biāo)記），而且你的待檢抗原表達(dá)也比較豐富的話，做直接法也未嘗不可。不過如果你不具備上述兩個條件的話，還是推薦你做間接法。

4、如果你做的是細(xì)胞骨架，那么就是用直接免疫熒光。如果是一般的蛋白表達(dá)，這個要看有沒有試劑是直接標(biāo)記的；如果沒有，還是只能考慮間接熒光。直接熒光相對間接熒光可以避免非特異姓染色，當(dāng)然步驟也少了些。我做過細(xì)胞骨架的直接染色，效果很好。