從原始孔中得到的陽性雜交瘤細胞，可能來源于二個或多個雜交瘤細胞，因此它們所分泌的抗體是不同質(zhì)的。為了得到*同質(zhì)的單克隆抗體，必須對雜交瘤細胞進 行克隆化。另一方面，雜交瘤細胞培養(yǎng)的初期是不穩(wěn)定的，有的細胞丟失部分染色體，可能喪失產(chǎn)生抗體的能力。為了除去這部分已不再分泌抗體的細胞，得到分泌 抗體穩(wěn)定的單克隆雜交瘤細胞系（又稱亞克隆），也需要克隆化。另外，*液氮凍存的雜交瘤細胞，復(fù)蘇后其分泌抗體的功能仍有可能丟失，因此也應(yīng)作克隆化， 以檢測抗體分泌情況。

    通常在得到針對預(yù)定抗原的雜交瘤以后需連續(xù)進行2-3次克隆化，有時還需進行多次。所謂克隆化是指使單個細胞無性繁殖而獲得該細胞團 體的整個培養(yǎng)過程。克隆化的方法很多，如有限稀釋法、軟瓊脂法、單細胞顯微操作法、單克隆細胞集團顯微操作法和熒光激活細胞分類儀（FACS）分離法。

雜交瘤細胞的凍存與復(fù)蘇

    （1）雜交瘤細胞的凍存。在建立雜交瘤細胞的過程中，有時一次融合產(chǎn)生很多“陽性”孔，來不及對所有的雜交瘤細胞作進一步的工作，需要把其中一部分細胞凍存起來；另一方面，為了防 止實驗室可能發(fā)生的意外事故，如停電、污染、培養(yǎng)箱的溫度或CO2控制器失靈等給正在建立中的雜交瘤帶來災(zāi)難，通常盡可能早地凍存一部分細胞作為種子，以 免遭到不測。在雜交瘤細胞建立以后，更需要凍存一大批，以備今后隨時取用。
    （2）雜交瘤細胞的復(fù)蘇。雜交瘤細胞、骨髓瘤細胞或其他細胞在液氮中保存，若無意外情況時，可保存數(shù)年至數(shù)十年。復(fù)蘇時融解細胞速度要快，使之迅速通過zui易受損的-5℃—0℃，以防細胞內(nèi)形成冰晶引起細胞死亡。

單抗特性的鑒定

⑴ 單克隆性的確定 包括雜交瘤細胞的染色體分析、單抗免疫球蛋白重鏈和輕鏈類型的鑒定和單抗純度鑒定等。
⑵ 單抗理化特性的鑒定。從實用意義上說，單抗對溫度和PH變化的敏感性以及單抗的親合力都是理化特性鑒定的主要項目，它們可為單抗的使用和保存提供重要依據(jù)。
⑶ 單抗與相應(yīng)抗原的反應(yīng)性測定。單抗與相應(yīng)抗原的反應(yīng)性決定于它所識別的抗原表位，確定單抗針對的表位在抗原結(jié)構(gòu)上的位置，是單抗特性鑒定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，同時，進一步分析這類表位的差別， 可正確評價單抗的特異性和交叉反應(yīng)性。[2] 

特點

編輯
    一是特異性，針對特定的單一抗原表位，它具有高度的特異性，抗腫瘤抗體藥物的研究表明，其特異性主要表現(xiàn)為特異性結(jié)合、選擇性殺傷靶細胞、體內(nèi)靶向性分布以及具有更強的療效。
二是多樣性，主要表現(xiàn)在靶抗原的多樣性、抗體結(jié)構(gòu)的多樣性、作用機制的多樣性等方面。
三是定向性，抗體藥物可以定向制造，就是根據(jù)需要制備具有不同治療作用的抗體藥物。基于這些特點，我們可以用來制成“生物”運送藥物至病害部位，主要是癌細胞，從而達到治療效果。[1] 

鼠源性單克隆抗體

    雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)的基本原理是利用聚乙二醇作為細胞融合劑，使免疫的小鼠脾細胞與具有不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細胞在體外進行融合，在HAT選擇性培養(yǎng)基的作用下，只讓融合成功的雜交瘤細胞生長，經(jīng)過反復(fù)的免疫學(xué)檢測篩選和單個細胞培養(yǎng)(克隆化)，zui終獲得既能產(chǎn)生所需單克隆抗體，又能不斷繁殖的雜交瘤細胞系，將這種細胞擴大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔，在其產(chǎn)生的腹水中即可得到價的單克隆抗體。由于單抗的應(yīng)用是從體外診斷向體內(nèi)腫瘤定位和治療方向發(fā)展，故鼠源性單抗出現(xiàn)了難以克服的缺點，特別是在體內(nèi)應(yīng)用時，存在主要組織相容性抗原(MHC)和超敏反應(yīng)問題。隨著鼠源單克隆抗體在臨床治療中越來越廣泛的應(yīng)用，降低抗體免疫原性的要求也變得越來越迫切。為了克服這一問題科學(xué)家利用基因工程方法使小鼠的抗體人源化。通過構(gòu)建人一鼠嵌合抗體，在一定程度上減弱了人抗鼠抗體。

人鼠嵌合抗體

    為了克服鼠源性單克隆抗體存在的問題，科學(xué)家利用基因工程方法使小鼠的抗體人源化。通過構(gòu)建人一鼠嵌合抗體，在一定程度上減弱了人抗鼠抗體。1984年Morrison等人成功地構(gòu)建了*個人鼠單克隆抗體即嵌合抗體。嵌合抗體指的是鼠單克隆抗體的可變區(qū)基因被人抗體的恒定區(qū)基因通過基因重組技術(shù)所替換而編碼并在合適的宿主細胞中表達而產(chǎn)生的單克隆抗體。
基本原理:抗體分了的特異性識別、抗原結(jié)合由輕鏈和重鏈可變區(qū)決定的，而異源蛋白產(chǎn)生的人抗鼠抗體反應(yīng)的主要是抗體恒定區(qū)。細胞

    將小鼠單抗恒定區(qū)用人源化恒定區(qū)代替而拼接成嵌合抗體，使其重鏈和輕鏈的可變區(qū)來白小鼠，恒定區(qū)來自人源性。簡言之嵌合抗體既具有抗原結(jié)合特異性，又大大地降低了鼠單抗的異源性。嵌合抗體是基因工程抗體zui早研究出來的一種抗體，在*和診斷方法已被廣泛的應(yīng)用。雖然嵌合抗體在一定程度上減弱了人抗鼠抗體反應(yīng)，但仍存在一少部分鼠源成分。這直接導(dǎo)致抗體被迅速清除，從而降低治療效果。[3]