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        合適的細胞培養基和血清怎樣選擇

        時間:2016-3-22閱讀:193
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             細胞培育是試驗室里zui常見和zui基本的實驗,但是不是zui簡單的。別以為細胞培育是一件簡單的事,這里也蘊藏著許多學問。有的時候細胞狀況不好的話,會導致轉染、藥篩這些實驗底子沒辦法做。影響細胞培育的因素有很多,我們先從培養基和血清開始說。

             經典的細胞培養基有很多種,例如Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是運用zui廣泛的。其他的例如M199、IMDM、L15培養基等也用于某些細胞的培育。

        ◆MEM是由Eagle’s基礎培育基(BME)開展而來的,其間添加了成分的規格及濃度。

        ◆Dulbecco改進的BEM(DMEM)培養基是專為小鼠成纖維細胞準備的,常用于貼壁細胞的培育。DMEM中氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,選用雙倍的HCO3-和CO2濃度可以起到十分好的緩沖效果。開端的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來為了滿足某些細胞的成長需求,將葡萄糖含量調整為4500 mg/L,這就是我們常說的低糖和高糖了。

        ◆aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,它可以廣泛用于各種細胞類型,包括對營養成分需求嚴苛的細胞。

        ◆Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而規劃的,如今也廣泛運用于克隆構成率的剖析及原代培育。F12還能夠與DMEM等體積混合運用,得到一種高濃度與成分多元化相的產品,這種培養基已運用于許多原代培育及更難養的細胞系的培育。

         

        ◆RPMI 1640培養基是用于淋巴細胞培育的,如今已廣泛用于懸浮細胞的培育。

             曾經常常聽到有人問,這種細胞該用哪一種培養基呢?其實這個疑問的答案可以很簡單,也可以很復雜。若是這種細胞是購自ATCC或其他的細胞庫,那很簡單,問供貨商就行了。或參考有關的文獻。Invitrogen上有一個Cell Line Database的東西,也很好用。挑選你感興趣的細胞類型,它就會顯示相應的培養基、血清和轉染試劑等,有時還有優化好的轉染進程,很方便。Sigma上也有一個Media Expert,包括培養基一切成分的功用描繪、運用推介和參閱文獻等,它仍是一個解決問題的能手,關于細胞培育中的常見疑問,如細胞貼壁欠好、培養基變色等,它都會列出相應的緣由,并提供解決的辦法。

            如果你是準備樹立一種全新細胞的培育體系,并且找不到任何參閱,那你就得花時間自己實驗了。在MEM中培育的細胞,很能夠在DMEM或M199中成長。總之,MEM做貼壁細胞培育、RPMI 1640做懸浮細胞培育是一個好的開始。你也可以購買多種培養基,然后花大概兩周的時間先做一個比較簡單的細胞成長試驗,然后從中挑選zui合適的。

             以前大多數實驗室都是用干粉培養基,但是制作的過程比較麻煩,需要溶解、調節pH值,過濾,在此過程中還會發生濃度誤差,而且有些實驗室的水質并不抱負,所以培育的效果會有差別。如果使用液體培養基,這種人為的誤差會降低。可能你會覺得液體培養基比較貴,以前是這樣,但是現在不一樣了。HyClone和Invitrogen都在國內建立了液體培養基的生產基地,生產和運輸的成本大大下降,所以如今的價格也比較便宜,比干粉培育基貴不了多少,而且還幫你省了過濾器和時間。

            血清富含成長因子,可以推進細胞的繁衍,富含的附著因子可推進細胞的貼壁,一起還具有抗*活性。血清也是礦物質、脂類及激素的重要來源。zui常用的血清有小牛血清、重生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早,營養物質越豐富,所含抗體也越少,因而胎牛血清適合需求高的細胞系和克隆化培育。由于瘋牛病的原因,到目前為止,中國政府依然制止從北美洲、歐洲和日本等地區進口牛血清,因此國內市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲,或是國產的

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