血液3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶光譜法定量檢測試劑盒產品說明書

【資料簡介】

點擊次數：8 發布時間：2010-11-27 22:25:55

 

血液3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶光譜法定量檢測試劑盒產品說明書 GMS50137.3 v.A
主要用途
GENMED血液3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶光譜法定量檢測試劑是一種旨在運用3-羥-3-甲戊二酰*作為底物，在還原酶的催化下，還原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光譜法來測定血液樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物或人體血液樣品（血清、血漿、紅細胞等）或純化酶樣品3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶的活性檢測，以及抑制劑篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。
技術背景
甲戊二羥酸通路（mevalonate pathway），又稱為3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶通路或甲戊二羥酸依賴性通路，是所有高等真核生物和許多細菌具有的重要的細胞代謝通路，用于體內產生二甲基丙烯焦磷酸（dimethylallyl pyrophosphate；DMAPP）和異戊二烯焦磷酸（isopentenyl pyrophosphate；IPP）作為生物大分子合成的基礎，包括蛋白質異戊二烯化、細胞膜維護、激素合成、蛋白固著、蛋白糖化等。3-羥-3-甲戊二酰*還原酶（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase；HMGR；EC1.1.1.34）是控制甲戊二羥酸通路的關鍵的酶，調節*和類異戊二烯脂分子的產生。HMG-COA還原酶位于內質網膜上，含有8個跨膜結構域，其中活性結構域在細胞漿里。HMG-COA還原酶是許多降脂藥物的靶標，包括lovastatin （Mevacor）、atorvastatin （Lipitor）、pravastatin（Pravachol）和simvastatin（Zocor）。在HMG-COA還原酶的催化下，將4個電子的3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原為甲戊二羥酸（mevalonate），同時產生還原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADPH）被氧化為氧化型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADP），其氧化后的吸光峰值變化（340nm 波長），來定量分析3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶的活性。3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶反應系統為：
產品內容
GENMED緩沖液（Reagent A） 毫升
GENMED反應液（Reagent B） 微升
GENMED底物液（Reagent C） 微升
GENMED陰性液（Reagent D） 微升
產品說明書 1份
保存方式
1
保存GENMED緩沖液（Reagent A）、GENMED反應液（Reagent B）和GENMED底物液（Reagent C）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；GENMED反應液（Reagent B）和GENMED底物液（Reagent C）避免光照；有效保證6月
用戶自備
抗凝管：用于血液樣品采集的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器
（微型）臺式離心機：用于樣品制備
比色皿或酶標板：用于光譜分析的容器
分光光度儀或酶標儀：用于光譜分析
實驗步驟
一、 樣品準備
選擇一：血漿樣品
1． 準備好抗凝管
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為2000g（或5000 RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
5． 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用GENMED Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－GMS30030.1）
6． 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
選擇二：血清樣品
1． 準備好不含抗凝劑的儲存管（注意：避免使用溶血樣品）
2． 抽取1毫升血液，置于儲存管里
3． 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結
4． 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為2000g（或5000 RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
6． 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用GENMED Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－GMS30030.1）
7． 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
選擇三：紅細胞樣品
1． 準備好抗凝管
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為2000g（或5000 RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心抽去上層黃色液體 （注意：避免觸碰白色液體層）
5． 小心移取500微升管底紅細胞到新的1.5毫升離心管（注意：避免觸碰上面白色液體層）
6． 加入500微升預冷的無離子水
7． 渦旋震蕩15秒
8． 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用GENMED Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－
2
GMS30030.1）
9． 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
二、 測定準備
1． 開啟并設定好分光光度儀（溫度為37℃）：波長340nm，間隔5分鐘，讀數2次（共10分鐘），并置零
2． 從－20℃冰箱里取出試劑，置于冰槽里融化；GENMED反應液（Reagent B）和GENMED底物液（Reagent C）避免光照
三、 背景對照測定
1． 移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent A）到新的比色皿
2． 加入xx微升GENMED反應液（Reagent B）
3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent C）
4． 上下傾倒數次，混勻
5． 在37℃溫度下孵育3分鐘
6． 加入xx微升GENMED陰性液（Reagent D）
7． 上下傾倒數次，混勻（限定在3秒之內）
8． 即刻放進分光光度儀檢測，此為背景空對照（0分鐘讀數－10分鐘讀數）
四、 樣品測定
1． 移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent A）到新的比色皿
2． 加入xx微升GENMED反應液（Reagent B）
3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent C）
4． 上下傾倒數次，混勻
5． 在37℃溫度下孵育3分鐘
6． 加入20微升待測樣品（500微克蛋白）（注意：樣品須清澈）
7． 上下傾倒數次，混勻（限定在3秒之內）
8． 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數（0分鐘讀數－10分鐘讀數）
五、計算樣品活性
[（樣品讀數－背景讀數）X樣品稀釋倍數X （分鐘）]＝單位/毫升÷（樣品蛋白濃度）毫克/毫升＝單位/毫克
單位＝微摩爾NADPH /分鐘
六、 酶標板測定
1． 在96孔酶標板上做好相應標記：背景對照和樣品
2． 分別移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent A）到96孔板中
3． 分別加入xx微升GENMED反應液（Reagent B）
3
4． 分別加入xx微升GENMED底物液（Reagent C）
5． 輕輕搖動96孔酶標板
6． 在37℃溫度下孵育3分鐘
7． 分別加入xx微升GENMED陰性液（Reagent D）或待測樣品（500微克蛋白）到相應孔中（注意：樣品須清澈）
8． 輕輕搖動酶標板
9． 即刻放進酶標儀檢測：0分鐘讀數和10分鐘讀數
10．活性計算：
單位＝微摩爾長NADPH /分鐘
注意事項
1． 本產品為20次操作，包括背景對照
2． 操作時，須戴手套
3． 系統操作過程中，背景測定只需1次
4． 建議使用比色皿測定
5． 樣品須澄清，至關重要
6． 加樣后3秒內光譜測定
7． 測定值由高到低變化；測定持續10分鐘
8． 光譜測定后，比色皿須清洗*
9． 樣本測定0分鐘讀數高于10分鐘讀數表明具有酶活性
10．如果10分鐘讀數高于0分鐘讀數，表明樣本沒有活性或檢測不到
11．建議待測樣本蛋白濃度為500微克/20微升（本公司提供 GENMED Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－GMS30030.1）
12．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
13．通常細胞3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶活性很低，為皮摩爾級，吸光讀數差值微小
14．如果樣本干擾較大，建議使用GENMED血液3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶活性比色法定量檢測試劑盒-GMS50358.3
15．3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶單位活性定義為：在37℃，pH 7.5條件下，每分鐘內氧化1納摩爾還原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）所需的酶量作為一個活性單位
16．本公司提供系列甲戊二羥酸（MEVALONATE）通路分析試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定檢測敏感
使用承諾
杰美基因秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，
4
保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
訂購信息
單組分訂購信息
編號 名稱 規格
GMS50137.3 GENMED血液3-羥-3-甲戊二酰*還原酶光譜法定量檢測試劑盒 20次
GMS50137.3A GENMED緩沖液（Reagent A） 5毫升
GMS50137.3B GENMED反應液（Reagent B） 5毫升
GMS50137.3C GENMED底物液（Reagent C） 5毫升
GMS50137.3D GENMED陰性液（Reagent D） 5毫升
試劑盒訂購信息
產品編號
名稱
規格
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細胞3-羥-3-甲戊二酰*（HMG-COA）還原酶光譜法定量檢測試劑盒
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