羅丹明123 簡易細胞核外形態染色試劑盒 產品說明書

【資料簡介】

羅丹明123 簡易細胞核外形態染色試劑盒
產品說明書
主要用途
羅丹明123 簡易細胞核外形態染色試劑是一種旨在通過熒光染料羅丹明123 快速集聚在細胞核周圍的活體
線粒體，呈現黃綠色，用于分析和觀察細胞核外圍形態的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、
成功實驗證明的。其適用于各種細胞核外或線粒體形態（動物、人體、植物、昆蟲等）的觀察。產品嚴格
無菌，即到即用，熒光清晰，操作簡捷，性能穩定。
技術背景
線粒體是細胞中重要的細胞器，大量存在于代謝旺盛的細胞中，分布在細胞核周圍。線粒體標記熒光探針
羅丹明123（Rhodamine123），是一種膜電位敏感的陽離子熒光染料，可以自由進入細胞，高度選擇性地聚
集在線粒體。在活細胞狀態下直接染色，借助480nm 或500nm 激發波長可以清晰看到被染成黃綠色的線狀
或顆粒小體的線粒體，分布在細胞核周圍。
產品內容
染色液（Reagent A） 微升
產品說明書1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證6 月
用戶自備
磷酸緩沖液：用于清洗樣品
微型臺式離心機：用于懸浮細胞的操作
蓋玻片：用于染色后封片
熒光顯微鏡：用于觀察細胞核DNA 染色
實驗步驟
一、貼壁細胞染色
1． 準備1 個細胞培養48 孔板的待測細胞，每孔鋪滿率達70％
2． （注意：可以使用載玻片，載玻片培養皿，35mm 培養皿，和其它培養孔板，見注意事項5）
3． 小心抽去細胞培養液
4． 輕輕沿著孔壁加入500 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS）到細胞培養孔，覆蓋培養孔表面
5． 小心抽去1 毫升磷酸緩沖鹽溶液（PBS）
6． 小心加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋培養孔表面
2
7． 小心加入xx 微升染色液（Reagent A）
8． 輕輕搖動培養板，使其混勻
9． 室溫下孵育60 分鐘，避免光照（或37℃培養箱里孵育15 分鐘）
10．小心抽掉染色液
11．小心加入200 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋培養孔表面
12．即刻在倒置熒光顯微鏡下進行觀察：
二、懸浮細胞染色
1． 將懸浮細胞（1 X 106 細胞）移入到1.5 毫升離心管
2． 放進微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3． 小心抽掉上清液
4． 加入500 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細胞顆粒群
5． 放進微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽掉上清液
7． 加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細胞顆粒群
8． 加入xx 微升染色液（Reagent A），混勻
9． 室溫下孵育60 分鐘，避免光照（或37℃培養箱里孵育15 分鐘）
10．放進微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
11．小心抽掉上清液
12．加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細胞顆粒群
13．移出5 微升到載玻片上，放上蓋玻片
14．即刻在熒光顯微鏡下進行觀察：
15．或即刻進行細胞流式儀分析：
注意事項
1． 本產品為100 次操作
2． 本產品友好使用于雙重染色或重疊染色
3． 操作時須戴手套
4． 操作時，避免污染母液
5． 本產品適合各種規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35mm 培養皿，和各種培養孔板，須相應
調整試劑溶液：
操作容器試劑溶液規格
載玻片100 微升
載玻片培養皿100 微升
35mm 培養皿500 微升
96 孔培養板50 微升
48 孔培養板100 微升
24 孔培養板200 微升
12 孔培養板400 微升
6 孔培養板500 微升
25cm2 細胞培養瓶1 毫升
6． 本產品可用于懸浮細胞或細胞脫離處理后染色
7． 如果染色固定后的細胞，室溫下孵育時間15 分鐘
8． 孵育時，須避免光照
9． 建議細胞染色完成后，即刻進行分析，不宜超過2 小時
10．細胞流式儀分析前，須混勻內容物
11．細胞流式儀分析，細胞檢測量不得少于10000 個
12．本公司提供系列簡易細胞核染色分析試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定熒光清晰