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        技術中心

        兔子白三烯B4(LTB4)酶聯免疫(Elisa)試劑盒說明書

        2016年09月09日 13:08:52人氣:164來源:上海谷研實業有限公司

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        關 鍵 詞試劑盒說明書
        【資料簡介】

        兔子白三烯B4(LTB4)酶聯免疫(Elisa)試劑盒說明書析試劑盒使用說明書
        本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中的含量。
        實驗原理:
        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中水平。用純化的抗體包被微孔板,往微孔中依次加入,再與 HRP 標記的 IGF-Ⅰ抗體結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中抗原濃度。
        兔子白三烯B4(LTB4)酶聯免疫(Elisa)試劑盒說明書試劑盒組成:
        試劑盒組成    48 孔配置    96 孔配置    保存     
        說明書     份     份              
        封板膜    2 片(48)    2 片(96)  
        密封袋     個     個    
        酶標包被板    ×48    ×96    2-8℃保存
        標準品:27µg/L    0.5ml× 瓶    0.5ml× 瓶    2-8℃保存
        標準品稀釋液    .5ml× 瓶    .5ml× 瓶    2-8℃保存
        酶標試劑    3 ml× 瓶    6 ml× 瓶    2-8℃保存
        樣品稀釋液    3 ml× 瓶    6 ml× 瓶    2-8℃保存
        顯色劑 A 液    3 ml× 瓶    6 ml× 瓶    2-8℃保存
        顯色劑 B 液    3 ml× 瓶    6 ml× 瓶    2-8℃保存
        終止液    3ml× 瓶    6ml× 瓶    2-8℃保存
        濃縮洗滌液    (20ml×20 倍)× 瓶    (20ml×30 倍)× 瓶    2-8℃保存
        兔子白三烯B4(LTB4)酶聯免疫(Elisa)試劑盒說明書樣本處理及要求: 
        .血清:室溫血液自然凝固 0-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
        2.血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 0-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
        3.尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
        4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 00 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
        5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
        6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
        7.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
        操作步驟
        .標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 0 孔,在*、第二孔中分別加標準品 00µl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50µl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取 00µl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50µl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl 棄掉,再各取 50µl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50µl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50µl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50µl,混勻后從第九第十孔中各取 50µl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50µl,濃度分別為 8µg/L,2µg/L ,6µg/L,3µg/L,.5µg/L)。
        2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 0µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
        4.配液:將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用。
        5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
        6.加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
        7.溫育:操作同 3。
        8.洗滌:操作同 5。
        9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5 分鐘.
        0.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
        .測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 5 分鐘以內進行。
        兔子白三烯B4(LTB4)酶聯免疫(Elisa)試劑盒說明書注意事項:
        . 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 5-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
        2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
        3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。
        4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
        5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        6. 底物請避光保存。
        7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
        9. 本試劑不同批號組分不得混用。
        0. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
        兔子白三烯B4(LTB4)酶聯免疫(Elisa)試劑盒說明書計算:
        以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)
        試劑盒性能:
        .樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.95 以上。
        2.批內與批見應分別小于 9%和 %檢測范圍:µg/L -20µg/L
        保存條件及有效期:
        .試劑盒保存:;2-8℃。
        2.有效期:6 個月

        上海谷研實業有限公司作者

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