大鼠載脂蛋白B（APOB）ELISA試劑盒使用說明書

【資料簡介】

 

 

 

大鼠載脂蛋白B(APOB)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用

檢測范圍：

 

2.6ng/L - 80ng/L

 

使用目的：

 

  96T

 

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子

(GDNF)含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)水

平。用純化的小鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，

往包被單抗的微孔中依次加入膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)，再與 HRP 標(biāo)記的膠

質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹

底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成

zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)呈正相關(guān)。用

酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來

源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)濃度。

 

ELISA試劑盒操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

80ng/L

40ng/L

20ng/L

10ng/L

5ng/L

5 號標(biāo)準(zhǔn)品

4 號標(biāo)準(zhǔn)品

3 號標(biāo)準(zhǔn)品

2 號標(biāo)準(zhǔn)品

1 號標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，

然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實(shí)際濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7 終止液

6ml×1 瓶

 

2 酶標(biāo)試劑

6ml×1 瓶

8 標(biāo)準(zhǔn)品（160ng/L） 0.5ml×1 瓶

 

3 酶標(biāo)包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

標(biāo)本要求

12 孔×8 條

6ml×1 瓶

6ml×1 瓶

6ml×1/瓶

9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 說明書

11 封板膜

12 密封袋

1.5ml×1 瓶

1 份

2 張

1 個(gè)

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間

控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)

算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月