植物ATP含量試劑盒分光光度法

【資料簡介】

植物ATP含量試劑盒分光光度法測定意義： 
ATP 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細胞能量
代謝狀態的主要參數。測定 ATP含量并且計算能荷，能夠反映能量代謝狀態。 
測定原理： 
肌酸激酶催化肌酸和 ATP反應生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸
含量，以此反應 ATP含量。 
自備儀器和用品： 
分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。 
試劑組成和配制： 
酸性提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存； 
堿性提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存； 
試劑一：粉劑×1支，4℃保存；臨用前加入 2mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保
存； 
試劑二：液體3mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入300μL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4
℃保存一周； 
試劑四：液體10mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑五：液體50mL×1 瓶，4℃保存； 
植物ATP含量試劑盒分光光度法標準液：液體10mL×1 瓶，1μmol/mLATP標準液，4℃保存； 
  ATP提取： 
1、血清（漿）中 ATP的提取：按照血清（漿）體積（mL） ：酸性提取液體積（mL）為 1：
5~10 的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入 1mL 酸性提取液） ，進行冰浴勻漿，8000g 4 
℃離心 10min；取上清液至另一 EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 
4  ℃離心 10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質含量測定） 。 
2、組織中 ATP 的提取：按照組織質量（g） ：酸性提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 酸性提取液），進行冰浴勻漿，8000g  4℃離心 10min，取上清
至另一 EP 管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g  4 ℃離心 10min，取上
清，置冰上待測（不可用于蛋白質含量測定） 。 
3、細胞或細菌中 ATP的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數
量（104
個）：酸性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入
1mL酸性提取液）， 超聲波破碎 1min （冰浴， 強度 20％或 200W， 超聲 2s， 停1s）， 8000g 4 ℃
離心 10min；取上清液至另一 EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 
℃離心 10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質含量測定） 。 
測定步驟： 
1、分光光度計預熱 30 min以上，調節波長到 700nm，蒸餾水調零。 
2、顯色劑的配制：臨用前請根據擬用顯色劑體積（樣本數×0.87m L），按試劑四(mL)：試
劑五（mL）=1：5 的比例配制。用多少配多少。 
3、樣本測定： 
試劑名稱(μL)  測定管  對照管  標準管  空白管 
樣本  30  30     
標準液      30  30 
試劑一  60    60   
試劑二  30  30  30  30 
試劑三  10    10   
蒸餾水    70    70 
充分混勻，37℃準確水浴 30min   
顯色劑  870  870  870  870 
37℃水浴 20min后，700nm下測定各管吸光值 
注意：空白管和標準管通常只需要各做一個。每個測定管設一個對照管。 
ATP含量計算： 
1、血清（漿）中 ATP含量計算 
ATP 含量(μmol/mL)=[C 標準管×(A 測定管－A 對照管)÷(A 標準管－A 空白管) 
×V1]÷(V3×V1÷V2)=20×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管) 
2、組織、細菌或細胞中 ATP含量計算 
（1）按蛋白濃度計算 
ATP 含量(μmol/mg  prot)=[C 標準管×(A 測定管－A 對照管)÷(A 標準管－A 空白管) 
×V1]÷(V1÷Cpr）=1×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷Cpr 
蛋白質含量需要另外測定。 
（2）按樣本鮮重計算 
ATP 含量 μmol/g 鮮重)=[C 標準管×(A 測定管－A 對照管)÷(A 標準管－A 空白管) 
×V1]÷(W×V1÷V2)=2×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷W 
（3）按細菌或細胞密度計算 
ATP 含量(μmol/104
  cell）=[C 標準管×(A 測定管－A 對照管)÷(A 標準管－A 空白管) 
×V1]÷(500×V1÷V2)=0.004×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷W 
C 標準管：標準液濃度，1μmol/mL；V1：加入反應體系中樣本體積，0.03mL；V2：加入
提取液體積，2mL；V3：加入血清（漿）體積：0.1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；  W：
樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500 萬。 
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