犬鐵蛋白（FE）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

【資料簡介】

犬鐵蛋白（FE）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
96T
10ng/ml-320ng/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關液體樣本中鐵蛋白（FE）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中犬鐵蛋白（FE）水平。用純化的犬鐵蛋白（FE）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入鐵蛋白（ FE），再與   HRP標記的鐵蛋白（FE）抗體結合，形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP  酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵蛋白（FE）呈正相關。用酶標儀在  450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中犬鐵蛋白（FE）濃度。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
2   酶標試劑
標準品（640ng/ml）     0.5ml×1瓶
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1份
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
犬鐵蛋白（FE）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
320ng/ml
160ng/ml
80ng/ml
40ng/ml
20ng/ml
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150µl的原倍標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  5號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  4號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  3號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  2號標準品加入  150µl標準品稀釋液
犬鐵蛋白（FE）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液：將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水  20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，