肝臟細胞RNA的提取

【資料簡介】

一．原理

RNA提取技術不僅是分子生物學技術的重要組成部分，也是功能基因組學科研技術的重要基礎。從RNA水平研究生物體內基因的調控機制，已成為分子生物學研究的一個重要手段。對某一生物或組織進行性狀研究，首先要獲得該性狀基因，從組織細胞中分離完整的RNA對于分子克隆和基因表達分析等實驗是至關重要的，如Northern印跡及雜交分析、cDNA合成等實驗的成效在很大程度上取決于RNA的質量。利用提取的RNA人們可以對特定的基因表達進行定量的檢測，從分子水平的了解細胞生命活動的規律。通常一個典型的哺乳動物細胞約含有10-5μgRNA ，其中80%～85%為rRNA（主要是28S、18 S和5.8 S、5S四種類型）；10%～15%為tRNA和核內小分子RNA。

這些高峰度的RNA的大小和序列確定，可通過凝膠電泳、密度梯度離心、陰離子交換層析和高壓液相層析（HPLC）分離。相反，占RNA總量1%～5%的為mRNA 。mRNA 雖然大小和核苷酸序列各不相同，從數百至數千堿基不等，但大多數真核細胞mRNA在其3"端均有一寡聚腺苷酸(polyA)組成的尾，其長度一般足以吸附于寡聚脫氧胸苷酸—纖維素