1,25二羥基維生素D3怎樣檢測

【資料簡介】

人1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                                                                       96T

6 ng/L -180ng/L

使用目的：

本 試 劑 盒 用 于 測 定 人 血 清 、 血 漿 及 相 關 液 體 樣 本 中  1,25  二 羥 基 維 生 素  D3

（1,25-(OH)2D3）含量。 實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人 1,25 二羥基維生素 D3（1,25-(OH)2D3）水平。 用純化的人 1,25 二羥基維生素 D3（1,25-(OH)2D3）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包 被單抗的微孔中依次加入 1,25 二羥基維生素 D3（1,25-(OH)2D3），再與 HRP 標記的 1,25 二 羥基維生素  D3（1,25-(OH)2D3）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗 滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的 1,25 二羥基維生素 D3（1,25-(OH)2D3）呈正相關。用酶標 儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人 1,25 二羥基維生素 D3（1,25-(OH)2D3）濃度。

試劑盒組成

1	30 倍濃縮洗滌液	20ml×1 瓶	7	終止液	6ml×1 瓶
2	酶標試劑	6ml×1 瓶	8	標準品（320 ng/L）	0.5ml×1 瓶
3	酶標包被板	12 孔×8 條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1 瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1 瓶	10	說明書	1 份
5	顯色劑 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 張
6	顯色劑 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟

1.    標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

160 ng/L	5 號標準品	150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
80 ng/L	4 號標準品	150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
40 ng/L	3 號標準品	150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
20 ng/L	2 號標準品	150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
10 ng/L	1 號標準品	150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.    加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.    溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.    溫育：操作同 3。

8.    洗滌：操作同 5。

9.    顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.  測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD  值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月