動物ELISA試劑盒的操作要點

【資料簡介】

    可用作動物ELISA試劑盒測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保留作多次檢測，宜少量分裝冰存。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。如在冰箱中保留過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA 中可使本底加深。保留血清自采集時就應留意無菌操縱，也可加入適當防腐劑。除特殊情況外，在醫學檢修中均以血清作為檢測標本。本文將敘述板式ELISA各個操縱步驟的留意要點，珠式、管式及磁性球ELISA，動物ELISA試劑盒均與特殊儀器配合應用，兩者均有具體的使用說明，嚴格遵照劃定操縱，必能得出正確的結果。ELISA試驗時，注意事項如下：
     1. 正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
    2. 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括：
    (1) 固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
   （2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
    (3) 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、動物ELISA試劑盒待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。