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        大鼠P糖蛋白酶聯免疫分析試劑盒的說明書

        2015年07月01日 12:35:21人氣:442來源:上海通蔚生物科技有限公司

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        關 鍵 詞大鼠P糖蛋白酶聯免疫分析試劑盒,大鼠P糖蛋白酶聯免疫分析試劑盒的說明書價格,大鼠P糖蛋白酶聯免疫分析
        【資料簡介】

            本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠P 糖蛋白(P-gp)水平。用純化的大鼠P 糖蛋白(P-gp)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入P 糖蛋白(P-gp),再與HRP 標記的P 糖蛋白(P-gp)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的P 糖蛋白(P-gp)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠P 糖蛋白(P-gp)濃度。
        試劑盒組成
        1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
        2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(800pg/ml) 0.5ml×1 瓶
        3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
        4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
        5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
        6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
        標本要求
        1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
        2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
        操作步驟
        1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
        400pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
        200pg/ml 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        100pg/ml 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        50pg/ml 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        25pg/ml 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
        4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
        5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。
        6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
        7. 溫育:操作同3。
        8. 洗滌:操作同5。
        9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
        10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
        11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
        計算
        以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

        上海通蔚生物科技有限公司作者

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