植物磷脂酶D（Phospholipase D）說明書

【資料簡介】

主要用途

 植物磷脂酶D（Phospholipase D）總水解活性酶連續循環比色法定量檢測試劑是一種旨在通過磷脂酶D、脂酶、甘油-3-磷酸氧化酶和過氧化酶酶連續反應系統中產生的紅色產物醌亞胺染料，在分光光度儀下峰值的增高， 即采用比色法來測定植物組織裂解樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、胚胎葉（cotyledon）、上胚軸（epicotyl）等裂解萃取樣品中磷脂酶D的總水解活性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

磷脂酶（phospholipase），是一種脂質水解酶，催化磷脂的水解，產生脂肪酸和其它親脂產物，參與磷脂代謝。磷脂酶家屬有四種類型亞酶，包括A、B、C和D。磷脂酶A（phospholipase A；PLA）主要水解磷脂sn-1（磷脂酶A1催化）和sn-2（磷脂酶A2催化）位置上的乙酰基；磷脂酶B（phospholipase B；PLB）同時水解磷脂的sn-1和sn-2位置上的乙酰基，又稱為溶血磷脂酶（lysophospholipase）；磷脂酶C（phospholipase C；PLC）在磷酸基前水解，釋放二酰基甘油（diacylglycerol；DAG）和第二信使分子三磷酸肌醇（inositol triphosphate）；磷脂酶D（phospholipase D；PLD；EC3.1.4.4）在磷酸基后水解，釋放磷脂酸（phosphatidic acid）。植物磷脂酶D，屬于異源性酶（heterogeneous enzyme）家屬成員，與哺乳動物磷脂酶D不同，有6個異構體：α、β、γ、δ、ε和ζ：PLDα是磷脂酰肌醇4,5二磷酸（phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate；PIP2）-非依賴性的zui常見的植物PLD酶，而PLDβ和PLDγ是磷酸磷脂酰肌醇輔因子（polyphosphoinositide cofactor）依賴性；PLDγ在氨基酸序列同源性和生化特性上類似于PLDβ；PLDδ為膜相關性，游離油酸（oleic acid）可以激活。PLD通過催化磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine；PC）、磷脂酰甘油（phosphatidylglycerol；PG）、磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine；PS）和磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine；PE）上磷酸二酯鍵（phosphodiester）的水解，產生磷脂酸和游離頭端基團（free head group）；磷脂酸作為信號分子，進一步水解為二酰基甘油，與跨膜信號功能、亞細胞結構質膜的降解和重構等有關。同時通過轉移磷脂基團到原生醇類的羥基上的磷脂轉移活性（transphosphatidylation）。PLD及其催化產物參與了植物組織對于環境應急反應，例如創傷、寒冷、干旱缺水、鹽化高滲透壓等。基于底物磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺，在磷脂酰肌醇4,5二磷酸和油酸的輔助下，通過磷脂酶D的作用，水解產生為磷脂酸和各種基團后，通過脂酶（lipase）、甘油-3-磷酸氧化酶（glycerol-3-phosphate oxidase）和過氧化酶（peroxidase）系統，測定紅色產物醌亞胺染料（quinoneimine dye）的峰值變化（500nm 波長），來定量分析磷脂酶D的總水解活性。磷脂酶D連續循環反應系統為：