大鼠磷酸化AKT蛋白（P-AKT）ELISA試劑盒

【資料簡介】

大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

l  本試劑盒僅供科研使用。

l  本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)的含量。

l  有效期：6個月

l  保存條件：2-8℃

實驗原理

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)水平。用純化的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT),再與HRP標記的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份	R.T.
封板膜	2片（48）	2片（96）	R.T.
密封袋	1個	1個	R.T.
酶標包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
標準品：180pg/ml	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
標準品稀釋液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶標試劑	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
樣品稀釋液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
終止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
濃縮洗滌液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

樣本處理及要求

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。