如何進行細胞周期的測定

【資料簡介】

一、原理 
細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。
 
單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。
 
BrdU（5-溴脫氧核苷）加入培養基后，可做為細胞DNA復制的原料，經過兩個細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應表現為一條單體淺染。如經歷了三個周期，則染色體中約一半為兩條單體均淺染，另一半為一深一淺。細胞如果僅經歷了一個周期，則兩條單體均深染。計分裂相中各期比例，就可算出細胞周期的值。
 
二、 儀器、用品與試劑
1.  儀器、用品：同常規細胞培養。
2.  試劑：BrdU（1.0 mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液。
 
三、操作步驟
1.  細胞生長至指數期時，向培養液中加入BrdU，使zui終濃度為10 μg/ml。
2.  44小時加秋水仙素，使每ml中含0.1 μg。
3.  48小時后常規消化細胞至離心管中，注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。
4.  常規染色體制片（見第三部分：染色體技術）。
5.  染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6 cm處紫外照射30分鐘。
6.  棄去2×SSC液，流水沖洗。
7.  （Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗，晾干。
8.  鏡檢100個分裂相，計*、二、三、四細胞期分裂指數。
9.  計算：
細胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小時）