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        技術中心

        人胰蛋白酶 (trypsin)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

        2015年01月13日 15:47:19人氣:684來源:上海滬震生物科技有限公司

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        關 鍵 詞人胰蛋白酶 (trypsin)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書,人胰蛋白酶 (trypsin)酶聯免疫分
        【資料簡介】

        人胰蛋白酶 (trypsin)酶聯免疫分析

        試劑盒使用說明書

        本試劑盒僅供研究使用。

        檢測范圍:                                                          96T

        0.8ng/mL - 28ng/mL

         

        使用目的:

        本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中胰蛋白酶 (trypsin)含量

        實驗原理

        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本胰蛋白酶 (trypsin)水平。用純化的胰蛋白酶 (trypsin)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰蛋白酶 (trypsin),再與HRP標記的胰蛋白酶 (trypsin)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰蛋白酶 (trypsin)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人胰蛋白酶 (trypsin)濃度。 

        試劑盒組成 

        1

        30倍濃縮洗滌液

        20ml×1瓶

        7

        終止液

        6ml×1瓶

        2

        酶標試劑

        6ml×1瓶

        8

        標準品(48ng/mL)

        0.5ml×1瓶

        3

        標包被

        12孔×8條

        9

        標準品稀釋液

        1.5ml×1瓶

        4

        樣品稀釋液

        6ml×1瓶

        10

        說明書

        1份

        5

        顯色劑A液

        6ml×1瓶

        11

        封板膜

        2張  

        6

        顯色劑B液

        6ml×1/瓶

        12

        密封袋

        1個

        標本要求 

        1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

        2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

        操作步驟

        1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

        24ng/mL

        5號標準品

        150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

        12ng/mL

        4號標準品

        150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

        6ng/mL

        3號標準品

        150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

        3ng/mL

        2號標準品

        150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

        1.5ng/mL

        1號標準品

        150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

         

         

        1. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻
        2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
        3. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
        4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
        5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
        6. 溫育:操作同3。
        7. 洗滌:操作同5。
        8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
        9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)
        10. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

        計算

          以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 

        注意事項

        1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

        2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

        3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

        1. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
        2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

        6.底物請避光保存。

        7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

        8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

        9.本試劑不同批號組分不得混用。

        10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

        保存條件及有效期

        1.試劑盒保存:;2-8

        2.有效期:6個月

        上海滬震生物科技有限公司作者

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