細胞的碘化丙啶染色用于FACS分析

【資料簡介】

FACS用于研究細胞組分DNA，碘化丙啶（PI）嵌入核酸雙鏈中并可以發(fā)熒光。它不能進入活細胞，但是可以進入正在或者已經死亡的細胞。因此PI可以用于免疫熒光染色來鑒定死細胞。DNA染色可以用于研究細胞周期。相對的DNA含量可以堅持G1，G2和S期細胞的比例。在DNA染色中凋亡的細胞有*的顏色。
 
一、材料和試劑
1.  TritonX-100（SigmaCatalogNo.T9284）

2.  碘化丙啶（SigmaCatalogNo.P-4170）

3.  乙醇

4.  RNaseA（SigmaCatalogNo.R4642）
 
二、儀器
1.  離心機

2.  流式細胞儀器（FACS）
 
三、步驟
1.  處理和收集細胞，將細胞固定到0.5 ml 70%EtOH（預冷到-20°C過夜）。

2.  存儲固定的細胞到冰上至少一個小時zui多到幾天。

3.  離心細胞2 min，4 000 rpm。

4.  在含有0.25%TritonX-100的0.5 ml PBS溶液中重懸細胞，并且在冰上孵育15 min。

5.  離心細胞2 min，4 000 rpm。

6.  棄掉上清液，并在含有10 μg/ml RNaseA和20 μg/ml PI儲存液的0.5 ml PBS重懸細胞，轉移到FACS管子中在黑暗中室溫孵育30分鐘。

7.  準備做FACS。