人睪酮（T）ELISA試劑盒使用原理

【資料簡介】

　　人睪酮（T）ELISA試劑盒使用原理
　　
　　檢測范圍：96T
　　
　　0.4nmol/L-12nmol/L
　　
　　使用目的：人睪酮T用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中睪酮（T）含量。
　　
　　實驗原理
　　
　　應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人睪酮（T）水平。用純化的人睪酮（T）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入睪酮（T），再與HRP標(biāo)記的睪酮（T）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的睪酮（T）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人睪酮（T）濃度。
　　
　　操作方法
　　
　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：人睪酮T提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
　　
　　12nmol/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　6nmol/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　3nmol/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　1.5nmol/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　0.75nmol/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　2.加樣：人睪酮T分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
　　
　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
　　
　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
　　
　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
　　
　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
　　
　　7.溫育：操作同3。
　　
　　8.洗滌：操作同5。
　　
　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
　　
　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
　　
　　11.測定：人睪酮T以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
　　
　　Eugon肉湯EugonBroth250g/瓶廣泛用于微生物的培養(yǎng)
　　
　　Eugon瓊脂EugonAgar250g/瓶廣泛用于微生物的培養(yǎng)
　　
　　胰蛋白示磷酸鹽肉湯TryptosePhosphateBroth250g/瓶用于苛養(yǎng)菌的增菌和培養(yǎng)
　　
　　小牛浸液肉湯VealInfusionBroth250g/瓶用于苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)
　　
　　小牛浸液瓊脂VealInfusionAgar250g/瓶用于苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)
　　
　　動力-硝酸鹽培養(yǎng)基（A法）Power-nitrateMedium250g/瓶用于細(xì)菌的動力試驗
　　
　　動力-硝酸鹽培養(yǎng)基（B法）Power-nitrateMedium250g/瓶用于細(xì)菌的動力試驗，每200ml培養(yǎng)基中需添加1支甘油（甘油）
　　
　　*瓊脂F(xiàn)errousSulfateAgar250g/瓶用于細(xì)菌產(chǎn)硫化氫試驗
　　
　　明膠培養(yǎng)基gelatinculturemedium250g/瓶用于細(xì)菌的明膠生化試驗
　　
　　*發(fā)酵培養(yǎng)基MannitolFermentationMedium250g/瓶用于*發(fā)酵試驗
　　
　　*培養(yǎng)基MannitolMedium250g/瓶用于*發(fā)酵試驗
　　
　　醋酸鉛培養(yǎng)基LeadAcetateMedium250g/瓶用于細(xì)菌產(chǎn)硫化氫試驗，每100ml培養(yǎng)基中添加1支10%醋酸鉛溶液