大鼠血管緊張素Ⅱ受體抗體酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

大鼠血管緊張素Ⅱ受體抗體酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)

檢測(cè)范圍：   96T

5pg/ml-400pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管緊張素Ⅱ受體抗體（ATⅡR）含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠血管緊張素Ⅱ受體抗體（ATⅡR）水平。用純化的大鼠血管緊張素Ⅱ受體（ATⅡR）抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠血管緊張素Ⅱ受體抗體（ATⅡR），再與HRP標(biāo)記的血管緊張素Ⅱ受體（ATⅡR）抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管緊張素Ⅱ受體抗體（ATⅡR）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠血管緊張素Ⅱ受體抗體（ATⅡR）濃度。

試劑盒組成

	30倍濃縮洗滌液	20ml×瓶	7	終止液	6ml×瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×瓶	8	標(biāo)準(zhǔn)品（800pg/ml）	0.5ml×瓶
3	酶標(biāo)包被板	2孔×8條	9	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	.5ml×瓶
4	樣品稀釋液	6ml×瓶	0	說(shuō)明書(shū)	份
5	顯色劑A液	6ml×瓶		封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×/瓶	2	密封袋	個(gè)

標(biāo)本要求

．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒操作步驟

.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

400pg/ml	5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	50μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200pg/ml	4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	50μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
00pg/ml	3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	50μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50pg/ml	2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	50μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25pg/ml	號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	50μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.

0.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

.     測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后5分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

試劑盒操作程序總結(jié)：

.準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘

3.洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應(yīng)0分鐘

5.加入終止液

6.5分鐘之內(nèi)度OD值

7.計(jì)算

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡5-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。

4．  請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

0. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月