培養基的配制

【資料簡介】

一、儀器設備及試劑
電爐
天平（0.0001 g）
高壓滅菌鍋
量筒：l0 ml、20 ml、100 ml、500 ml
燒杯：1000 ml、500 ml、250 ml
移液管：1 ml、2 ml、 5 ml
吸管若干、記號筆
三角瓶或試管、試管架
錫鉑紙、玻璃棒
配制好的各種母液，如大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽、有機物、生長調節劑等，個別生長調節劑要隨配隨用。
蒸餾水、pH試紙
蔗糖、瓊脂 等
          1 mol/L NaOH 溶液、1 mol/L HCl溶液 。
  二、方法和步驟
1 量取所配培養基總體積的2/3體積的蒸餾水，如要配l升培養基, 先量取約700 ml體積的水。
        2 根據培養基配方， 用量筒量取所需要的各種元素的母液。
 

物質	加入體積或重量
大量元素母液(10×)	100ml
微量元素母液(1000×)	1 ml
有機物質母液(1000×)	1 ml
鐵鹽母液(1000×)	10 ml
蔗糖	30 g
瓊脂	8 g

吸取母液時，注意應先將幾種母液按順序排好，不要弄錯以免使培養基中藥品成分發生改變。在培養不同的外植體時，應加入不同的激素，如本實驗中培養康乃馨側芽或莖段時就加入1ml的1 mg/ml的6-BA；而另一個實驗胡蘿卜愈傷組織培養中應加入2ml的1 mg/ml的2,4-D。加入一種母液后應先攪拌均勻，避免因不均而使局部濃度過高而引起沉淀，瓊脂可于加入蔗糖調節完pH值后再加入，此時應注意攪拌，以免瓊脂或蔗糖沉淀于燒杯底而炭化。加熱至沸騰片斷，以使瓊脂充分溶解，檢查時可注意燒杯內溶液是否透明。
      3 調節培養基的pH值，用pH計或pH試紙測定
培養基的pH按照培養材料的要求分別用       1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液來調節所配制培養基的pH值，一般培養基的pH值約為5.8，培養的材料不同，對培養基的pH值要求也不同。
4 分裝   將配制好的培養基分別裝在事先洗凈的三角瓶，用錫鉑紙封口，注明標簽，然后和用牛皮紙或報紙包好的培養皿及用三角瓶裝好的蒸餾水一道進行高壓滅菌。
          5 培養基的滅菌   一般用手提式醫用高壓鍋來滅菌（方法略），本實驗采用全自動高壓滅菌鍋。
6 培養基的保存   消毒過的培養基通常放在接種室或培養室中保存，一般 應在消毒后的兩周內用完，不要超過一個月。
 
三、注意事項
激素應在調節pH之前加入，因為有些激素是用酸或堿溶解的，在調節pH好之后加入會改變pH值。pH過酸或過堿對培養基均是不利的，會導致過軟或過硬的結果，從而影響培養質量。
在本次實驗中將下次實驗所需的其它材料一同滅菌處理。