人白細胞介素-15ELISA 檢測試劑盒

【資料簡介】

試驗原理：
IL-15試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-15濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。ELISA 檢測試劑盒先將IL-15和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-15的濃度呈比例關系。

自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
 
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
 
操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
 
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用，ELISA 檢測試劑盒應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
 
操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。
 
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。
 
結果 判 斷 與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
 
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），ELISA 檢測試劑盒相應的IL-15標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的IL-15含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
 
3、檢測值范圍：0-800pg/ml
 
4、敏感度： 1.0 pg/ml

Y142313 * 鑒別用 -20℃，避光 1.6PNA單位/支 140731-200501
Y142314 * HPLC法含量測定 2-8℃，避光 20mg/4℃ 140730-20060
Y142315 賴脯胰島素 HPLC法含量測定 4℃，避光 25mg 140729-200501
Y142316 * HPLC法含量測定 -20℃，避光 50mg 140728-200803
Y142317 γ-* 鑒別 常溫，避光 20mg 140723－200501
Y142318 角鯊烯 含量測定 2-8℃，避光 0.5ml 140721-200601
Y142319 一磷酸腺苷鈉 含量測定 常溫，避光 20mg 140719-200501
Y142320 脫氧核糖*核苷酸鈉  含量測定 2-8℃，避光 20mg 140718-200501
Y142321 脫氧核糖胸腺嘧啶核苷酸鈉  含量測定 -20℃，避光 20mg 140717-200501
Y142322 脫氧核糖腺嘌呤核苷酸鈉 含量測定 -20℃，避光 20mg 140716-200501
Y142323 脫氧核糖胞嘧啶核苷酸鈉 含量測定 -20℃，避光 20mg 140715-200501
Y142324 抗眼鏡蛇毒原血漿（馬源） 檢查 -20℃，避光 20mg 140713-200501
Y142325 * HPLC法含量測定 2-8℃，避光 256μg/支 140711-200702
Y142326 * UV法含量測定 常溫，避光 20mg 140710-200401
Y142327 * 含量測定 常溫，避光 50mg 140709-201003
Y142328 胸腺嘧啶 有關物質檢查 常溫，避光 100mg 140708-200401
Y142329 * 含量測定 常溫，避光 200mg 140706-200702
Y142330 L-* HPLC法含量測定 常溫，避光 600mg/支 140705-200602
Y142331 琥珀酰明膠 含量測定 常溫，避光 700mg 140704-200401
Y142332 去羥* 含量測定 常溫，避光 100mg 140703-200401
Y142333 N-（2）-L-丙氨酰-L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140702-200501
Y142334 * 鑒別 -20℃，避光 25mg 140700-200401
Y142335 鹽酸半* 供鑒別與 常溫，避光 100mg 140699-201001
Y142336 * 供鑒別用 2-8℃，避光 2ml 140697-200602
Y142337 L-鹽酸* 含量測定 常溫，避光 100mg 140693-200401
Y142338 * 鑒別 常溫，避光 200mg 140692-200301
Y142339 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140691-200401
Y142340 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140689-200401
Y142341 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140688-200401
Y142342 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140687-200401
Y142343 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140686-200401
Y142344 L-異* 含量測定 常溫，避光 100mg 140683-200401
Y142345 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140682-200401
Y142346 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140681-200401
Y142347 L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140680-201002
Y142348 L-* 含量測定 常溫，避光 50mg 140677-200405
Y142349 胞磷*鈉 HPLC法含量測定 常溫，避光 50mg 140675-200803
Y142350 * 鑒別 常溫，避光 10mg 140674-200401
Y142351 * 供鑒別及含量測定用 常溫，避光 100mg 140673-201006
Y142352 N-乙酰-L-* 含量測定 常溫，避光 100mg 140672-200501
Y142353 乙酰半* 含量測定 常溫，避光 100mg 140671-200501
Y142354 * HPLC法含量測定 常溫，避光 50mg 140669-200903
Y142355 D-核糖 含量測定 常溫，避光 10mg 140668-200301
Y142356 * HPLC法含量測定 4℃，避光 20mg 140667-200601