一步法快速檢測三聚氰胺試劑盒（條）說明書

【資料簡介】

Ⅰ  新產品名稱，目錄編號及內容物

產品名稱	規格	內容物
新產品研發銷售單位：     上海銳聰公司 （Lanhao Bio-phama. Co. Ltd.） 美國哥倫比亞生物公司 （Columbia Bio LCC.） 新產品負責人： 王進輝 通訊地址：   上海市閘北區共和新路1010號（佳和商務大廈）801室 郵政編碼： 200070 ： 傳真： 現場用一步法三聚氰胺定性快速檢測試劑盒（試紙條）	10條/包
實驗室用一步法三聚氰胺定量快速檢測的試劑盒（ELISA）	96孔盤的檢測量

 

Ⅱ  新產品描述

應市場需求，我公司與美國哥倫比亞生物公司合作，并以美國哥倫比亞生物公司發明的一步法快速免疫檢測技術平臺為基礎開發生產兩種*的快速而簡易的一步法三聚氰胺快速檢測試劑產品，該產品以20分鐘的一次性反應取代耗時與繁瑣的常規步驟（其整個過程一般需7至24小時多達10個步驟：抗體包埋 （2～12小時），封閉（2～3小時），樣品結合 （1～2小時），洗滌（5～15 分鐘），*抗體結合（2～3 小時），洗滌（5～15 分鐘），第二抗體結合（1～2小時），洗滌（5～15 分鐘），顯色（5～20 分鐘），讀盤（1分鐘）），從而使得檢測過程簡單化和快速化。使用現場用一步法三聚氰胺定性快速檢測試劑盒的用戶無需設備和專業技能就可進行檢測；而使用實驗室用一步法三聚氰胺定量快速檢測試劑盒的用戶即可進行無需設備的初步定量檢測，也可使用簡單的ELISA讀盤機進行簡單的專業技術檢測。

 

Ⅲ  應用

• 現場一步法三聚氰胺定性快速檢測試紙條主要用于：

現場定性檢測三聚氰胺，無需設備，例如牛奶現場檢測，家庭用戶檢測奶制品及飼料是否含有三聚氰胺等。

• 實驗室用一步法三聚氰胺定量ELISA快速檢測試劑盒主要用于：

定量檢測三聚氰胺的含量，可使用設備或不使用設備均可進行定量檢測，而這區別僅在于定量的精度不同，非常方便技術監督、檢驗檢疫部門進行產品質量檢測，對于沒有設備的區縣級監督檢驗機構可運用無需設備的初步定量檢測。

 

Ⅳ  特點：

⑴簡便：簡單的一步法反應  （常規方法需6步以上：抗體包埋，封閉，樣品結合，洗滌，*抗體結合，洗滌，第二抗體結合，洗滌，顯色，讀盤）；

⑵快速：樣品檢測時間為20分鐘左右；

⑶準確：檢測準確，檢測限—快速檢測試劑條<2 mg/kg （L）, ELISA試劑盒小于0.1 mg/kg （L）,   重現性好；

⑷方便：一步法三聚氰胺定量快速檢測ELISA試劑盒用戶，初步定量檢測無需設備就可進行檢測；

⑸價廉：本一步法產品費用低廉。

 

Ⅴ  貯藏

試劑盒里的各種試劑可貯存于（2-8 °C）冷藏柜，于盒上標注日期前用完。

 

Ⅵ試驗設計

1.檢測原理

本試劑盒采用免疫競爭法檢測三聚氰胺。微量反應板上包被有抗三聚氰胺抗體。反應后，加入三聚氰胺酶結合物和三聚氰胺標準品或樣品，游離三聚氰胺與三聚氰胺酶結合物競爭微量反應板上的抗三聚氰胺抗體，沒有結合的酶結合物被洗去。再向反應孔中加入相應反應底物，作用一定時間后，結合的酶結合物將底物轉化為藍色的產物，加入終止液后顏色由藍色變為黃色，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，讀取各孔OD值。就可計算出樣品中的三聚氰胺濃度。

2.提供的試劑

⑴ 用鋁箔袋真空包裝的96孔板 （12×8條），內含指示干燥劑

⑵ 濃度分別為 0µg/L, 20µg/L, 50µg/L, 100µg/L,200µg/L, 500 µg/L 的5瓶三聚氰胺標準液

⑶ 1瓶 稀釋液

⑷ 1 瓶 三聚氰胺HRP酶標記物.

⑸ 1 瓶 底物.

⑹ 1 瓶 停止液.  （注意! 1N 鹽酸. 勿接觸皮膚.）

3.額外所需物品（未包含在該試劑盒中）

⑴ 帶450 nm濾光片的酶標儀（根據檢測精度要求可選擇是否使用），計時器

⑵ 20 mM PBS： 0.62g NaH₂PO₄-2H₂O+5.73gNa₂HPO₄-12H₂O+9gNaCl  蒸餾水定容至1000ml

4. 樣品預處理

• 固體樣品

⑴ 潮飼料的提取方法：稀釋系數：100

① 用攪拌機均質樣品直至呈糊狀

② 用10 mL 60% MeOH/水萃取2 g樣品并劇烈渦旋振蕩

③ 超聲裂解樣品1 min

④ 再次渦旋振蕩樣品1 min。靜置5 min使其分層

⑤ 10000 rpm離心10min

⑥ 用G6玻璃濾紙過濾清澈的上層相，然后用干凈的瓶子儲存提取液

⑦ 用樣品稀釋液將清澈的提取液稀釋20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

⑧ 此稀釋的樣品可直接用于試驗

回收率介于75-117%

⑵ 干飼料的提取方法：稀釋系數：200

① 用攪拌機均質干貓糧樣品

② 稱取1 g均質樣品，加10 mL 60% 甲醇/水

③ 劇烈渦旋振蕩后超聲裂解樣品1min。再次振蕩1min后靜置5min

④ 10000 rpm離心10min

⑤ 用G6玻璃濾紙過濾清澈的上層相，然后用干凈的瓶子儲存提取液

⑥ 用樣品稀釋液將清澈的提取液稀釋20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

⑦ 此稀釋的樣品可直接用于試驗

• 液體樣品

① 取液體樣品，用稀釋液稀釋，根據液體樣品的不同隨產品提供相應稀釋濃度的說明。

5.步驟（注意: 標準及樣品做平行試驗以增加準確度.）

⑴ 將所有試劑及樣品置于室溫下，用實驗室級的水充滿洗瓶

⑵ 從鋁箔袋中取出相應數量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮

⑶ 吸取100ul標樣或稀釋的樣品提取液到相應的微孔。每個樣品使用一個新的吸頭。每孔加50ul三聚氰胺HRP酶標記物

⑷ 輕輕混合30秒，孵育30分鐘

⑸ 孵育完后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用洗液*充滿微孔，震蕩后倒掉，重復三次，總共洗板四次

⑹ 在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干

⑺ 每孔加入100ul底物溶液

⑻ 孵育20分鐘

⑼ 每孔加入100ul終止液

⑽ 用酶標儀讀取450nm下的吸光值