大鼠前列腺素E2（PEG2）ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒說明書

【資料簡介】

大鼠前列腺素E2（PEG2）ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒　　

　　使用說明書

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測范圍：48T/96T

　　15pg/ml-360pg/ml

　　使用目的：

　　大鼠前列腺素E2（PEG2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒用于測定大鼠組織樣本中大鼠前列腺素E2（PEG2）含量。

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　大鼠前列腺素E2（PEG2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠前列腺素E2（PEG2）水平。用純化的大鼠前列腺素E2（PEG2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素E2（PEG2），再與HRP標(biāo)記的前列腺素E2（PEG2）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2（PEG2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠前列腺素E2（PEG2）濃度。

　　試劑盒組成

　　120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶

　　2酶標(biāo)試劑3ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（720pg/ml）0.5ml×1瓶

　　3酶標(biāo)包被板12孔×4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶

　　4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份

　　5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張

　　6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個

　　標(biāo)本要求

　　1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

　　3．組織處理：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　操作步驟

　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：大鼠前列腺素E2（PEG2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　360pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　180pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　90pg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　45pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　22.5pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　7.溫育：操作同3。

　　8.洗滌：操作同5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

　　3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6．底物請避光保存。

　　7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9．本試劑不同批號組分不得混用。

　　10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

　　保存條件及有效期

　　1．試劑盒保存：2-8℃。

　　2．有效期：6個月。