雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶聯免疫分析（ELISA）

【資料簡介】

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶聯免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定雞血清、血漿、或其它組織液中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平。用純化的抗-雞sIgA抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入sIgA，再與HRP標記的羊抗雞抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）濃度。

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	30ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（2700ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求

1．標本處理：（1）血清或血漿：可直接用于檢測

            （2）組織：選取新鮮的組織，取2g組織用剪刀剪成小碎塊（2～5mm大?。?。然后將組織碎塊加入10mL離心管，加入2mL樣品生理鹽水,，室溫下孵育5小時（期間不時旋渦混合）后勻漿，2500轉/分離心10分鐘，取1ml上清液備用，待測。

            （3）培養物：向培養物中加入2ml生理鹽水，室溫孵育1小時（期間不時旋渦混合）后2500轉/分離心10分鐘，取上清待測。

（4）按相關文獻提取后，取上清液待測

3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

4．可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為（1800ng/L ，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L ， 150ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

1. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
2. 嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準

6．底物請避光保存。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

8．本試劑不同批號組分不得混用。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測范圍：

100ng/L – 2000ng/L

規格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月