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        技術中心

        大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA操作說明書

        2013年07月29日 11:11:14人氣:932來源:上海哈靈生物科技有限公司

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        關 鍵 詞大鼠極低密度脂蛋白,VLDL,大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒,大鼠極低密度脂蛋白說明
        【資料簡介】
        大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒使用說明書
        本試劑盒僅供研究使用。
        檢測范圍: 48T
        3μg/ml -120μg/ml
        使用目的
        本試劑盒用于測定大鼠肝細胞及相關液體樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)含量。
         
        實驗原理
        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)水平。用純化的大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入極低密度脂蛋白(VLDL),再與HRP 標記的極低密度脂蛋白(VLDL)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的極低密度脂蛋白(VLDL)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)濃度。
        試劑盒組成
        1 20倍濃縮洗滌液 20ml× 終止液 3ml×
        酶標試劑 3ml× 標準品(240μg/ml 0.5ml×
        酶標包被板 12 孔× 標準品稀釋液 1.5ml×
        樣品稀釋液 3ml× 10 說明書 
        顯色劑 3ml× 11 封板膜 
        顯色劑 3ml×1/ 12 密封袋 
         
        標本要求
        1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
        2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
         
        操作步驟
        1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
        120μg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
        60μg/ml 4 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        30μg/ml 3 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        15μg/ml 2 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        7.5μg/ml 1 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
        2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育3分鐘。
        4. 配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
        5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復次,拍干。
        6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
        7. 溫育:操作同3
        8. 洗滌:操作同5
        9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
        10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
        11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
         
        計算
        以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
         
        注意事項
        1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
        2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
        3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
        4 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
        5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        6.底物請避光保存。
        7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
        8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
        9.本試劑不同批號組分不得混用。
         
        存條件及有效期
        1.試劑盒保存:;2-8℃。
        2.有效期:個月__

        上海哈靈生物科技有限公司作者

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