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        技術(shù)中心

        丙酮酸激酶_PK_說明書

        2012年11月27日 15:24:02人氣:486來源:上海研盟生物科技有限公司

        資料類型pdf文件資料大小137236
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        關(guān) 鍵 詞丙酮酸激酶_PK_,酶聯(lián)免疫分析,試劑盒,說明書
        【資料簡介】

        丙酮酸激酶_PK_實驗原理
        本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中丙酮酸激酶(PK) 水平。用純化的丙酮酸激酶(PK)
        抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入丙酮酸激酶(PK) ,再與 HRP
        標(biāo)記的丙酮酸激酶(PK) 抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物
        TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏
        色的深淺和樣品中的丙酮酸激酶(PK) 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD
        值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中丙酮酸激酶(PK) 濃度。  
        丙酮酸激酶_PK_試劑盒組成  
        1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
        2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品(800 mU/L )  0.5ml×1 瓶
        3  酶標(biāo)包被板  12孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
        4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
        5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 張    
        6  顯色劑 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 個
        丙酮酸激酶_PK_標(biāo)本要求  
        1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
        馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
        2.不能檢測含 NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
        丙酮酸激酶_PK_操作步驟
        1.   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
        釋。
        400 mU/L   5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        200 mU/L   4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        100 mU/L   3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        50 mU/L   2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        25 mU/L   1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
         
         
        2.   加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
        待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
        然后再加待測樣品 10 µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
        量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3.   溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
        4.   配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
        5.   洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此
        重復(fù)5 次,拍干。
        6.   加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。  
        7.   溫育:操作同 3。
        8.   洗滌:操作同 5。
        9.   顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
        15分鐘.
        10.  終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
        11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。  測定應(yīng)在加終止
        液后15 分鐘以內(nèi)進行。

        上海研盟生物科技有限公司 作者

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