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        技術中心

        狗微管相關蛋白tau(MAPT)ELISA檢測試劑盒實驗原理

        2022年03月25日 15:51:20人氣:215來源:上海谷研實業有限公司

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        關 鍵 詞狗微管相關蛋白tau(MAPT)ELISA檢測試劑盒?,狗微管相關蛋白tau(MAPT)ELISA檢
        【資料簡介】

        狗微管相關蛋白tau(MAPT)ELISA檢測試劑盒說明書

         

        優勢:

        1、抗體----高效、靈敏、特異性好

        2、規范包被操作----吸附均勻、吸附性好、空白值低、孔底透明度高

        3、先進的優化方案----重復性高,可靠性強

        4、高標準技術服務要求:靈敏度高,特異性強 

        5、適用范圍廣:血漿、血清、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等多種類型的樣本

        檢測原理

        試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被組胺(HIS)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺(HIS)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

        狗微管相關蛋白tau(MAPT)ELISA檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法

        1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

        2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

        3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

        4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

        5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

        自備物品

        酶標儀(450nm)

        高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

        37℃恒溫箱

        操作注意事項

          試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

          實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

          濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,終結果乘以5才是樣本實際濃度。

          嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

          所有液體組分使用前充分搖勻。

        試劑盒組成

        名稱96孔配置48孔配置備注

        微孔酶標板12孔×8條12孔×4條

        標準品0.3mL*6管0.3mL*6管

        樣本稀釋液6mL3mL

        檢測抗體-HRP10mL5mL

        20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

        底物A6mL3mL

        底物B6mL3mL

        終止液6mL3mL

        封板膜2張2張

        說明書1份1份

        自封袋1個1個

        注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、12.5、25、50、100、200 mg/L

        狗微管相關蛋白tau(MAPT)ELISA檢測試劑盒試劑的準備

         20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

        洗板方法

          手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

          自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

        操作步驟

          從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

          設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

          樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

          除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

          棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

          每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

          每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

        結果判斷

         繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

          

        狗微管相關蛋白tau(MAPT)ELISA檢測試劑盒試劑盒性能

         準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

         靈敏度:低檢測濃度小于1.0 mg/L。

         特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

         重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

         貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

         有效期:6個月

        免責聲明

          試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

          嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

         

         

         

         


        上海谷研實業有限公司作者

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