大鼠腦紅蛋白（NGB）elisa試劑盒說明書

【資料簡介】

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒說明書
 

　　檢測原理
 

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人鈣衛蛋白(Calprotectin)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人鈣衛蛋白(Calprotectin)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。
 

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法
 

　　.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
 

　　2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
 

　　3.  細胞上清液：3000轉離心0分鐘去除顆粒和聚合物。
 

　　4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心0分鐘取上清。
 

　　5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 

　　自備物品
 

　　.     酶標儀(450nm)
 

　　2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
 

　　3.     37℃恒溫箱
 

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒操作注意事項
 

　　.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
 

　　2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。
 

　　3.  標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預處理后的樣本無需稀釋，直接取0μL加樣即可。
 

　　4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
 

　　5.  所有液體組分使用前充分搖勻。
 

　　試劑盒組成
 

　　名稱96孔配置48孔配置備注
 

　　微孔酶標板2孔×8條2孔×4條無
 

　　標準品(20μg/g)0.6mL0.6mL按說明書進行稀釋
 

　　標準品稀釋液6mL3mL無
 

　　樣本稀釋液6mL3mL無
 

　　檢測抗體-HRP0mL5mL無
 

　　20×洗滌緩沖液25mL5mL按說明書進行稀釋
 

　　底物A6mL3mL無
 

　　底物B6mL3mL無
 

　　終止液6mL3mL無
 

　　封板膜2張2張無
 

　　說明書份份無
 

　　自封袋個個無
 

　　注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：20、60、30、5、7.5、3.75 μg/g
 

　　試劑的準備
 

　　20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份的20×洗滌緩沖液加9份的蒸餾水。
 

　　洗板方法
 

　　.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
 

　　2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡min，洗板5次。
 

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒操作步驟
 

　　.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
 

　　3.  待測樣本孔先加待測樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL；
 

　　4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體00μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
 

　　6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育5min。
 

　　7.  每孔加入終止液50μL，5min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
 

　　結果判斷
 

　　繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
 

　　試劑盒性能
 

　　.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
 

　　2.  靈敏度：檢測濃度小于.0μg/g。
 

　　3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
 

　　4.  重復性：板內、板間變異系數均小于5%。
 

　　5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
 

　　6.  有效期：6個月
 

　　免責聲明
 

　　.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
 

　　2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。