ELISA法檢測白細胞介素-10

【資料簡介】

IL-10主要由Th2細胞產生，但Tho細胞、Th，細胞、CD8+T細胞、活化的B細胞、單核-巨噬細胞、kupffer細胞、肝細胞、角化細胞等也可產生。IL-10參與抑制細胞合成炎性因子、集落刺激因子（CSF）等主要負反饋調節機制，能廣譜抑制單核-巨噬細胞炎性介質ILl、IL-6、IL-8、TFN-γ的合成及表達；在免疫反應，可抑制Th：細胞產生細胞因子IL-2、IL-3、TFNγ等，其機制可能是通過與受體結合改變細胞內信號的傳導途徑而選擇性抑制有關細胞因子mRNA的合成，IL-10能抑制Th，細胞的增殖及分泌IL-2、TFN-γ等細胞因子，抑制Th：細胞介導的免疫反應。正常肝內存在的IL-10就可以通過上述機制或直接拮抗TNF等細胞因子的作用而抑制機體的抗病毒免疫，故有抗肝組織炎性損傷的作用。
[檢測方法] ELISA法
[方法學原理] 在微孔反應板上包被抗人ILlo單克隆抗體，待測標本和標準品中的IL-10會與抗人IL-10單克隆抗體結合，游離的成分被洗去，同時加人*化的抗人IL10抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。*與親和素特異結合，抗人IL-10抗體與結合在單克隆抗體上的人IL-10結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應孔中有IL-10，HRP會使五色的顯色劑呈現藍色，加終止液變黃色。在波長450nm處測吸光度，IL-10濃度與吸光度成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中
的IL-10濃度。
[標本準備] 靜脈血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．預包被微孔反應板
2．濃縮酶結合物
3．酶結合物稀釋液
4．標準晶和標本稀釋液
5．濃縮*化抗體
6．ILl0標準品
7．濃縮洗滌液
8．顯色劑A、B
9．終止液
[儀器] 酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
（檢測步驟）
1．在微孔反應板相應孔中分別加入待測樣本、不同濃度標準品100ul，再加*化抗體工作液50rd。
2．振蕩混勻，置20～25℃環境中溫育120min。
3．將孔內液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。
4．除空白孔外，加入酶結合物工作液100ul。
5．振蕩混勻，置20-25C環境中溫育30min。
6．將孔內液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。
7．每孔加入顯色劑A、B各50u1，輕輕振蕩混勻，37℃環境中避光顯色10min。
8．加入終止液50ul后，輕輕振蕩混勻。用酶標儀（450nm波長）測定各孔吸光度，與標準曲線對照，求出IL-10水平。
[正常參考值] 各實驗室可根據檢測方法的不同確立正常參考值。
[注意事項]
1.試劑盒從冷藏環境中取出時應在室溫環境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存。
2．酶標板洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內有游離酶不能洗凈。應設定30-60s的洗滌浸泡時間。
3．滴加試劑前應將滴瓶翻轉數次，使液體混勻。滴加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。
4．所有樣品和廢棄物都應按傳染源處理。終止液為2mol／L硫酸，使用時應注意安全。
5．每批樣本應同時做標準曲線。
6．檢測劑工作液按說明書臨用前配置。
7．若標本吸光度在標準曲線測定范圍以外，應適當稀釋后重測。
[臨床意義] 在多發性硬化急性期IL-10水平處于低值，而緩解期水平則上升；SLE患者急性期IL-10 mRNA表達量明顯增高，緩解期水平則降低；類風濕關節炎及骨關節炎患者急性期IL-10水平顯著升高，緩解期水平則降低。