脂氧合酶活性測定試劑盒說明書

【資料簡介】

脂氧合酶（Lipoxygenase, LOX）活性測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

LOX 廣泛存在于動植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應，導致膜脂過氧化。在生物體

的生長發育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。

測定原理：

LOX 催化亞油酸氧化，氧化產物在 280nm 處有特征吸收峰；測定 280nm 吸光度增加速率，

來計算 LOX 活性。

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL

試劑一）進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測。

測定：

1. 分光光度計預熱 30 min，調節波長到 280nm，蒸餾水調零。

2. 在試劑三中加入 25mL 試劑二（振蕩混勻 1min），在 30℃水浴中預熱 10 min 以上。用不

完的試劑 4℃保存。

3. 對照管：依次在 1mL

石英比色皿中加入

100μL

樣本和

900μL

試劑二，30℃反應

30min

后，記錄 A 對照。

4. 測定管：依次在 1mL

石英比色皿中加入

100μL

樣本和

900μL

試劑三，30℃反應

30min

后，記錄 A 測定。

5. ΔA=A 測定-A 對照

LOX 活性計算公式：

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×100

= 33.33×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。

LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×100

= 33.33×ΔA÷W

Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒；

V 樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1mL；V 反總：反應總體積，1mL；V 樣總：

上清液總體積，1mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min。