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        小鼠早期生長反應因子1(EGR1)elisa試劑盒使用方法

        2020年02月28日 13:35:17人氣:212來源:上海一研生物科技有限公司

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        關 鍵 詞小鼠早期生長反應因子1(EGR1)elisa試劑盒,小鼠早期生長反應因子1(EGR1)elisa試劑
        【資料簡介】

        小鼠早期生長反應因子1(EGR1)elisa試劑盒說明書
        本試劑盒僅供研究使用。
        實驗原理
        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠早期生長反應因子1(EGR1)水平。用純化的小鼠早期生長反應因子1(EGR1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入早期生長反應因子1(EGR1),再與HRP標記的早期生長反應因子1(EGR1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的早期生長反應因子1(EGR1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠早期生長反應因子1(EGR1)濃度。
        小鼠早期生長反應因子1(EGR1)elisa試劑盒操作步驟
        1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
        200ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
        100ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
        50ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
        25ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
        12.5ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
        2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
        4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
        5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
        6.加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。
        7.溫育:操作同3。
        8.洗滌:操作同5。
        9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
        10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
        11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
        計算
        以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
        小鼠早期生長反應因子1(EGR1)elisa試劑盒注意事項
        1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
        2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
        3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zuihao控制在5分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。
        4.請每次測定的同時做標準曲線,zuihao做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔diyi孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
        5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        6.底物請避光保存。
        7.嚴格按照的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
        8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
        9.本試劑不同批號組分不得混用。
        保存條件及有效期
        1.試劑盒保存:2-8℃。
        2.有效期:6個月
         

         

        上海一研生物科技有限公司作者

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