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        采用酶標法（ELISA）進行三聚氰胺檢測
        
		
        
			
        2011年11月16日 10:55:22人氣：369來源：上海酶聯生物研究所
        
			
        






















    
    
    
    

    
    


    

                                    
                                    
                                    
                                     
    


        
			
			
														  
		
        
        
        
        	
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        上 傳 人上海酶聯生物研究所 需要積分0
        
            
        關 鍵 詞采用酶標法（ELISA）進行三聚氰胺檢測,采用酶標法（ELISA）進行三聚氰胺檢測,采用酶標法（EL
        
        
        
		        
		
		
		
						
		
		        
        
        	
        【資料簡介】
        
            
        本實驗方案采用Thermo Scientific的Multiskan MK3型酶標儀和Wellwash 4MK2型洗板機（由北京平利洋公司提供），，結合Abraxis三聚氰胺檢測試劑盒，以競爭法測抗原的原理對液態奶或奶粉中的三聚氰胺進行檢測分析。
        一、樣品準備 
        巴氏消毒全脂奶（液體）： 
        1）用稀釋液以1:10的比例稀釋牛奶樣品，如在900 μl的稀釋液中加入100 μl牛奶。
        嬰幼兒配方奶粉： 
        1）按照配方奶粉的說明，以稀釋液溶解奶粉，如用60 ml稀釋液溶解8.6克奶粉。
        2）用稀釋液以1:5的比例稀釋奶粉溶液
        二、樣品檢測 
        1）試劑使用前，應使其溫度恢復至室溫（25±2℃） 
        2）吸取100 μl標準品（0, 20, 50, 100, 200和500 ppb）和準備好的樣品加入相應的微孔中。然后，每孔再加入50 μl的三聚氰胺HRP酶標記物。
        3）利用MK3酶標儀的振蕩功能，振板60秒，并在室溫下孵育30分鐘。
        4）孵育完后，將微孔板轉移到Wellwash 4MK2洗板機上進行洗板，每孔加250 μl洗液，洗板四次。
        5）每孔加入100 μl顯色底物溶液，避光孵育20分鐘。
        6）每孔加入100 μl終止液，終止顯色反應。
        7）在MK3酶標儀上讀板，測量波長450nm。
        三、結果分析 
        1）以濃度為0 ppb標準品的吸光值為基準（B0），歸一化標準品的檢測吸光值B/B0（B指除B0以外的標準品吸光值）。
        2）繪制以標準品的B/B0為Y軸坐標、對應的標準品濃度為X軸坐標的散點圖。
        3）對該散點圖進行直線擬合。以該擬合曲線的直線方程對待測樣品濃度進行計算。
        4）如果樣品吸光值大于zui小標樣的吸光值，則該樣品的濃度＜20 ppb；如果樣品吸光值小于zui大標樣的吸光值，則樣品的濃度＞500 ppb。
        5）結合稀釋倍數，計算zui終液態奶或奶粉中的三聚氰胺濃度，如液態奶稀釋倍數是10倍。
         
        
        
        
				
		
		

		
		
		
		
		

		
		 
    
        
	
	
	
        
		
        
			
        
				
        
				
        
					
        上海酶聯生物研究所作者
        
				
        
			
        
			
			
        
		
        
			    	
       
    
        
	
	
        
												
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