Cell Counting Kit-8

【資料簡介】

Cell Counting Kit-8
目錄號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 包裝
A1210-100 Cell Counting Kit-8 100 T 1ml
A1210-500 Cell Counting Kit-8 500 T 5ml
A1210-1000 Cell Counting Kit-8 1000 T 10ml
A1210-3000 Cell Counting Kit-8 3000 T 30ml
保存：4℃密封避光保存，有效期一年。
產(chǎn)品簡介：
Cell Counting Kit-8 簡稱 CCK-8 試劑盒，為 MTT 法的替代方法，是一種基于 WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)
名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的
快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗
使用說明：
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細胞具體數(shù)量時）
1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度，每組 3-6 個復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫
坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（試用
此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。）
二、細胞活性檢測
1、在 96 孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在 37℃,5% CO 2 的條件下）。
2、向每孔加入 10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
4、用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三、細胞增值- 毒性檢測
1、在 96 孔板中配置 100 μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時（在 37 ℃，5% CO2 的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24 或 48 小時）。
3、向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)
有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加
入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
5、用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
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活力計算：.
細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[A(0 加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力