丙二醛（MDA）終點比色法定量檢測試劑盒產品說明書

【資料簡介】

丙二醛（MDA）終點比色法定量檢測試劑盒產品說明書 主要用途 丙二醛（MDA）終點比色法定量檢測試劑是一種旨在通過TBARS（硫代巴比妥酸反應物）技術，檢測與之反應的丙二醛，其產物丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物，在分光光度儀下，檢測其吸光峰值的變化，即采用比色法測定樣品中總丙二醛含量的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物、人體等細胞、組織、血液、體液、培養液丙二醛的含量檢測。廣泛用于細胞氧化應急研究，特別是脂質過氧化的分析。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，重復性好。 技術背景 脂質過氧化反應（lipid peroxidation；LPO）是動物和植物細胞損傷的一種機制，也是評價細胞和組織氧化應急的標志。含有兩個或以上雙鍵（double bond）的多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acid）對自由基以及其它活性氧化族高度敏感，導致產生脂質過氧自由基LOO＋（lipid peroxyl radical），使脂類氧化（lipid oxidation）。脂質過氧化自由基LOO＋同時通過攻擊分子內雙鍵，經環化、裂解形成環狀內過氧化物（cyclic endoperoxide），例如丙二醛（malondialdehyde；MDA）。作為脂質過氧化性低分子量終端產物之一的丙二醛，廣泛用于脂質過氧化反應的指標。在丁羥甲苯（Butylated Hydroxytoluene；BHT）和EDTA的參與幫助減少干擾性脂類氧化的情況下，丙二醛與硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid；TBA）進行反應，產生丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物（MDA－TBA2），通過分光光度儀（532nm波長）來定量分析丙二醛的含量，其反應方式為： malondialdehyde +2 thiobarbituric acid → MDA－TBA2 產品內容 抗干擾液（Reagent A） 500微升 萃取液（Reagent B） 1.25毫升 反應液（Reagent C） 5管 補充液（Reagent D） 10毫升 稀釋液（Reagent E） 1.5毫升 產品說明書 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里，抗干擾液（Reagent A）和反應液（Reagent C）避免光照，并密封；萃取液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月 用戶自備 恒溫培養箱：用于反應孵育 酶標板：用于比色的容器 酶標儀：用于樣品比色分析 實驗步驟 實驗開始前，將試劑盒中的反應液（Reagent C） 置入冰槽里。移取250微升稀釋液（Reagent E）到 反應液（Reagent C）管里，渦旋混勻，標記為反應工作液（10次操作量）。同時設定好酶標儀（溫度為25℃）：波長532nm，并置零。然后進行下列操作。 1．準備好1個96酶標板孔，并做好相應標記：背景對照和樣品 2．分別移取140微升補充液（Reagent D） 3．分別加入10微升抗干擾液（Reagent A） 4．分別加入50微升補充液（Reagent D）或待測樣品（注意：總量為1至2毫克總蛋白） 5．用槍頭混勻 6．分別加入25微升萃取液（Reagent B） 7．用槍頭混勻 8．分別加入25微升反應工作液 9．輕輕搖動酶標板，混勻 10．放進60℃恒溫培養箱，孵育60分鐘 11．放進酶標儀檢測 12．樣品實際讀數：（樣品讀數－背景對照讀數） 13．計算樣品總濃度 [樣品實際讀數X樣品稀釋倍數X 0.25（毫升，測定容量）]÷[0.05（樣品容量，毫升）X 156（毫摩爾吸光系數）X 0.6]＝微摩爾/毫升÷（樣品蛋白濃度）毫克/毫升＝微摩爾/毫克 注意事項 1．本產品為50次（96孔板）操作 2．操作時，須戴手套 3．萃取液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全 4．反應液（Reagent C）為固體，避免在室溫下放置；配制后，有效期1周 5．抗干擾液（Reagent A）和反應液（Reagent C）避免光照，并密封 6．本產品檢測敏感度可達0.05微摩爾丙二醛 7．50微摩爾的過氧化氫會干擾檢測（使丙二醛減少13％）；而蔗糖和果糖則不影響檢測 8．如果樣品含有過高的蛋白成分，建議進行樣品去蛋白處理 9．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度 10．正常樣品的丙二醛濃度相當低，約在皮摩爾水平，即10至100皮摩爾/毫克蛋白 11．本公司提供系列丙二醛檢測試劑產品 質量標準 1．本產品經鑒定性能穩定 2．本產品經鑒定檢測敏感